第3章酶学资料.ppt

生物化学与分子生物学;Enzymology;酶的概念;酶学研究简史;;第一节酶的分子结构与功能The Molecular Structure and Function of Enzyme;酶的不同形式:;一、酶的分子组成中常含有辅助因子;全酶分子中各部分在催化反应中的作用:;辅助因子分类 （按其与酶蛋白结合的紧密程度）;;转移的基团;金属酶(metalloenzyme) 金属离子与酶结合紧密，提取过程中不易丢失。 金属激活酶(metal-activated enzyme) 金属离子为酶的活性所必需，但与酶的结合不甚紧密。 ;金属离子的作用： 参与催化反应，传递电子； 在酶与底物间起桥梁作用； 稳定酶的构象； 中和阴离子，降低反应中的静电斥力等。;某些金属酶和金属激活酶 ;二、酶的活性中心是酶分子中执行其催化功能的部位;酶分子中氨基酸残基侧链的化学基团中，一些与酶活性密切相关的化学基团。;活性中心内的必需基团;;溶菌酶的活性中心;三、同工酶催化相同的化学反应 ;根据国际生化学会的建议，同工酶是由不同基因编码的多肽链，或由同一基因转录生成的不同mRNA所翻译的不同多肽链组成的蛋白质。 同工酶存在于同一种属或同一个体的不同组织或同一细胞的不同亚细胞结构中，它使不同的组织、器官和不同的亚细胞结构具有不同的代谢特征。这为同工酶用来诊断不同器官的疾病提供了理论依据。 ;H;LDH同工酶;检测组织器官同工酶的变化有重要的临床意义 ;举例 2;第二节 酶的工作原理The Mechanism of Enzyme Action;在反应前后没有质和量的变化； 只能催化热力学允许的化学反应； 只能加速可逆反应的进程，而不改变反应的平衡点。;（一）酶对底物具有极高的效率 ;底物;一种酶仅作用于一种或一类化合物，或一定的化学键，催化一定的化学反应并生成一定的产物。酶的这种特性称为酶的特异性或专一性。;根据酶对底物选择的特点，酶的特异性可分为两种类型 ：;2.相对专一性(relative specificity) ;（三）酶的活性与酶量具有可调节性;（四）酶具有不稳定性;二、酶通过促进底物形成过渡态而提高反应速率;反应总能量改变 ;（二）酶与底物结合形成中间产物 ;诱导契合作用使酶与底物密切结合;;2. 邻近效应与定向排列使诸底物正确??位于酶的活性中心 ;邻近效应与定向排列：;酶的活性中心多是酶分子内部的疏水“口袋”，酶反应在此疏水环境中进行，使底物分子脱溶剂化 (desolvation)，排除周围大量水分子对酶和底物分子中功能基团的干扰性吸引和排斥，防止水化膜的形成，利于底物与酶分子的密切接触和结合。这种现象称为表面效应(surface effect)。 ;胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶活性中心“口袋” ;（三）酶的催化机制呈多元催化作用;胰凝乳蛋白酶的共价催化和酸-碱催化机制 ;第三节 酶促反应动力学 Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction ;酶促反应动力学：研究各种因素对酶促反应速率的影响，并加以定量的阐述。 影响因素包括：酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等。;一、底物浓度对反应速率影响的作图呈矩形双曲线;;;当底物浓度高达一定程度：;单底物、单产物反应； 酶促反应速率一般在规定的反应条件下，用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示； 反应速率取其初速率，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速率 底物浓度远远大于酶浓度。;中间产物;;E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速率取决于慢反应即 V = k3[ES]。 (1) S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S] =[St]。;米－曼氏方程式推导过程：;当底物浓度很高，将酶的活性中心全部饱和时，即[Et] =[ES]，反应达最大速率 Vmax = k3[ES] = k3[Et] (5);;2．Km值是酶的特征性常数 ; 酶;3．Km在一定条件下可表示酶对底物的亲和力 ;5．酶的转换数 ;1. 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法;2. Hanes作图法;二、底物足够时酶浓度对反应速率的影响呈直线关系;当[S]＞＞[E]，酶可被底物饱和的情况下，反应速率与酶浓度成正比。 关系式为：V = k3 [E];三、温度对酶促反应速率的影响具有双重性;;酶的最适温度不是酶的特征性常数，它与反应进行的时间有关。 酶的活性虽然随温度的下降而降低，但低温一般不使酶破坏。温度回升后，酶又恢复其活性。 ;四、pH通过改变酶和底物分子解离状态影响酶