转染丙型肝炎病毒NS2基因对人肝细胞及环境中巨噬细胞的影响.pdf

转染丙型肝炎病毒???蚨匀烁蜗赴?盎肪持芯奘上赴?挠?响摘丙型肝炎病毒?Ⅵ属黄病毒科，基因组为单股正链????幸桓??相互作用，抑制??瓸中文摘要要目的：丙型肝炎病毒????????琀?????瓯籆??确?现，到目前为止，全球约有??亿人感染，占世界人口的??％。我国也是丙型肝炎高发区，健康人群中抗??粜月饰?．?ァ??感染的慢性化率较高，由此增加了发展为肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌?????????????琀??捌渌?喙刂滤佬愿尾〉姆缦铡?开放阅读框，编码一个多聚蛋白前体，后者在病毒自身蛋白酶和宿主蛋白酶的作用下被切割为结构蛋白??、?、?、?，和非结构蛋?籒?、?????、??、??和??一共?种病毒蛋白。作为连接??峁沟鞍?和非结构蛋白关键部分的??鞍滓恢笔茄芯康娜鹊悖?浒被?艘览涤谒?主信号肽切割，羧基端则由????鞍酌复呋?陨砬懈钣隢?分离而释放。释放出的具有功能的??鞍孜2《靖腥鞠赴??匦瑁?箍刹斡氲骺?宿主细胞的增殖和基因表达。????等发现??敫卧嗵匾斓拇俚蛲鲆?子??．??????甶????诱导的细胞凋亡。??箍梢种脾驨—?基因启动子的活性，从而阻止宿主体内信号通路发挥抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用。本研究应用??型???昊?蛭D０澹?菇?薍???婧吮泶镏柿???．???，脂质体转染人肝细胞株???⒒竦梦榷ㄗH镜牡タ寺≈辏?佣訪?增殖水平及所分泌细胞因子的影响角度了解??运拗飨赴?淖饔谩?肝脏中存在枯否氏细胞?奘上赴?、?细胞等固有免疫细胞，它们在机体抗病毒感染中发挥着重要的作用，但多个研究表明，??诟卧?微环境中可通过自身蛋白干扰免疫细胞的信号转导，从而抑制免疫应答，有利于持续存在于宿主体内。本研究通过应用?????、室将转染???因的??赴?肴司奘上赴?才嘌??硬煌??郊觳饩奘上赴?浠??荚?研究????鞍住⒏蜗赴?⒕奘上赴??咴诟卧辔⒒肪持械南嗷プ饔茫?以期为以??;?〉母蜗赴?┓⑸??坪虷?免疫逃逸研究提供新的???????．?? 结果：中文摘要方法：?覬?．?????全长基因质粒上通过??椒ɡ┰鯤?基因，连接至???甌载体，测序正确后，经??????双酶切，将其克隆至真核表达质粒???瓹??菇ㄖ刈檎婧吮泶镏柿???．?．???璈???、????盖泻笄碇?堑缬炯?ú⒉庑颉??直鹛崛〖按炕痯??．?????和???瓹?籒?质粒，脂质体转染肝细胞株?????┪锷秆。?竦梦榷ㄗH局刈橹柿５牡タ寺∠?胞?????瓹?畍???和?????瓹???。通过荧光显微镜观察??鞍子ü馇慷龋?崛∠赴?躌?后??觳饽康幕?騁?．???提取细胞总蛋白行??????检测??甆?融合蛋白的表达以鉴定。?逋馀嘌鳯?、?????瓹?畍???和?????瓹?甆???种细胞，待对数生长期，消化计数后接种于?孔板?×??觯??，分别于培养????，??保?靠准尤隡?溶液??，?。?嘌?浞跤???吸取孔内培养液，用酶标仪检测???Φ奈?舛戎担琈?法检测不同时间点肝细胞增殖的动态变化。?逋馀嘌鳯?、?????瓹?籿???、?????瓹?甆??种细胞，待对数生长期，消化计数后接种于?装????个／孔???后提取细胞总??琑??畉????觳庀赴?蜃??．???????．???水平变化。?獿?、?????瓹?畍???、?????瓹????窒赴???巨噬细胞??共培养，并设单独培养的巨噬细胞??为对照。于共培养?、??螅?杖【奘上赴鸗??崛∽躌?，???????觳庀?胞因子???????、?．?、??????水平变化；于共培养?????螅?【奘上赴鸗??锨澹?褂肅???觳饩奘上赴鸗??置诘难仔韵赴?蜃拥谋浠?挥诠才嘌??、??后，收取巨噬细胞??提取细胞总蛋白，??????检测细胞内转录因子???⒘姿峄疭??的活性。?晒?菇ㄕ婧吮泶镏柿???．???，经?????????盖?后琼脂糖凝胶电泳鉴定有约???笮∑?未嬖冢?庑蚪峁?允居?视角。???????????????? 和?????瓹???细胞组，三组细胞之间增殖水平无差别??．???两组问无差异?覱．???示???芰考傲姿峄疭雕∞表达无明显改变。?????狢???。经??欤徊釲????????组中有目的基因??检测结果显示有????诤系鞍椎谋泶铩???水平高??姬、儿一?均显著高于其他三个对照组????窃匦蛄幸恢隆??竦梦榷ㄗH局刈橹柿５牡タ寺∠赴鸏????．?．???????甆?的表达，??????细胞增殖曲线显示，??赴?椤?????．?．????赴????细胞??．????峁?允荆篖????．?．??细胞组抑炎因??水平较??赴?楹蚅????．??畍???细胞组升高??．??挥隠?组比较，?????瓹?畍???细胞组和?????瓹?甆??赴?榇傺滓蜃覫????表达水平降低，但转质粒???赴鸕?