多功能显微镜的使用研究报告.ppt

第一节 生物制片技术;按材料处理方法分： 1、整体封片法： 将微小的昆虫或昆虫的部分器官整体封片。;3、压碎制片法 将松软的组织在载玻片上，用盖玻片压碎展平的一种方法;5、组织切片法 观察昆虫组织器官结构形态的制片方法。;二、石蜡切片 把材料包埋在石蜡中，连同石蜡一起切片 主要过程： 取材→固定→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→脱蜡→复水→染色→脱水→透明→封固 ;第二节 多功能显微镜的使用;α; η －介质折射率，香柏油为1.515 α－孔径角的一半，小于90o。 干燥系物镜的NA值小于1， 油镜的 NA值最大为1.4 ;2、分辨率 光学仪器能够区分两个相临物点之间的最小距离。 0.61λ 0.61λ d = = η·sinα NA λ－光波长 ;;3、放大率 总放大率M＝物镜放大率（Mob）x目镜放大率（Moc） Δ —镜筒长度（标准镜筒长160mm） Mob＝ F1 —物镜焦距 250 —明视距离（mm） Moc＝ F2 —目镜焦距 Δ 250 M ＝ x F1 F2 ; 有效放大倍数M有效： d肉眼 — 肉眼分辨本领 M有效= d仪器 — 仪器分辨本领 人肉眼在250毫米远处分辨率为0.2mm。 光学显微镜的有效放大倍数应为1000倍。;总放大率经验值： 显微镜的最适的总放大率，是标准镜筒长下，所使用的物镜NA值的500－1000倍。 超出此范围称为“无效放大”。;4、焦深 K·η D= M ·NA 焦点深度，与总的放大倍率、物镜的数值孔径成反比。 增加标本周围介质的折射率可增加焦深。;5、现场直径 　　指显微镜下看到的视场内所能容纳被检物体的实际范围。 　 FN　 　目镜视场数 Φ＝ Mob　　 物镜放大倍率;6、镜像亮度与视场亮度 （1）镜象亮度与物镜数值孔径的平方成正比 （2）镜象亮度与总放大率的平方成反比 镜像亮度：显微镜下图像的明暗程度 视场亮度：显微镜下整个视场的明暗程度;7、复盖差 盖玻片厚度不标准产生的相差。盖玻片标准厚度0.17mm 放大倍率越高、NA越大，复盖差越明显。 8、工作距离 物镜前透镜到被检物体之间的距离。 放大倍率越高工作距离越小，40Χ 物镜不超过0.6mm，100Χ 物镜不超过0.2mm。;三、象差;色差的校正: （1）采用单色光作光源 （2）利用凸、凹透镜的色差彼此相反，将其胶合在一起消除色差。;2、球差;球差的消除措施： 利用凸、凹透镜的球差彼此相反，将其胶合在一起消除球差。 ;3、场曲;四、显微镜的光学部件;根据物镜前透镜与盖玻片之间的介质不同： （1）干燥系物镜，40x以下物镜，NA值均小于1 （2）水浸系物镜 （3）油浸系物镜，90－100x，NA值可大于1;根据物镜放大率的高低： （1）极低倍物镜 0.5x 0.75x （2）低倍物镜 1x — 6x NA 0.04-0.15 （3）中倍物镜 6x — 25x NA 0.15-0.40 （4）高倍物镜 25x — 63x NA 0.35-0.95 （5）油浸物镜 90x — 100x NA 1.25-1.40 ;;;（5）特种物镜 带校正环的物镜 校正盖玻片厚度不规则带来的复盖差 带虹彩光阑物镜 调节物镜的数值孔径，改变焦深 相差物镜 无荧光物镜 无罩物镜（No cover objective) 标有NC，不加盖玻片 长工作距离物镜;2、目镜 2－5片透镜分2组或3组构成 惠更斯目镜 冉姆斯登目镜 普通目镜， 2片平凸透镜构成 凯尔勒目镜 补偿目镜 标有K，可消除物镜残留色差 平场物镜 标有P，视场平坦 广视场物镜 标有W，具有较大的视场，视场平坦;3、聚光镜