细胞化学染色重点.ppt

细胞化学染色;细胞化学染色，是一种以形态为基础，结合运用化学或生物化学技术对血细胞内各种化学成分作定位、定性及半定量分析的方法。 用于研究血细胞生理、病理和化学结构； 临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后监测和发病机制的探讨，提供重要依据。;血细胞化学染色的基本要求是在原位显示细胞成分和结构，反应产物应是有色沉淀物，具有一定的稳定性。 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、酶、蛋白质等。;（一）固定 固定有物理法与化学法， 物理法为干燥和火焰固定， 化学法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。;（二）显示 1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存在。 2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧，使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。;3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。 4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀。 5、金属沉着法 其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学诊断。 ;（三）细胞化学定量 粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。 百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受色强弱。 积分法，是常用的半定量法，将等级估量与百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低，又反映了细胞受色的强弱。;下面介绍几种常用的细胞化学染色方法 这些方法学在白血病的鉴别诊断上具有重要意义。;一、过氧化物酶染色（POX） ;【试剂】 1%TMB 亚硝基铁氰化钠饱和溶液 1%过氧化氢溶液 稀过氧化氢溶液 瑞氏染色液; 【操作】 1. 取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10ml，溶液呈淡棕黄色。 2. 在新鲜干燥的血片上，加混合溶液0.5ml, 放置lmin后，再加稀过氧化氢溶液0.7ml，染色6min 。 3. 瑞氏染液复染15～20min 。 4. 油镜镜检。; 【结果】 细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。 （－） 无颗粒沉着； （±） 颗粒细小 ，分布稀疏； （+） 颗粒较粗，局灶分布； （++） 颗粒粗大，分布较密，占胞质 1/2~2/3； （+++） 颗粒粗大，呈团块分布； （++++） 全部胞质均部满颗粒，可覆盖胞核。;【临床意义】 （1）粒系： POX主要分布在粒细胞和单核细胞内，随着粒细胞成熟的程度而逐渐增强，中性分叶核粒细胞为强阳性。 嗜酸性粒细胞阳性程度最强，其阳性颗粒比中性粒细胞粗大，有折光。 碱性粒细胞为阴性。 ;（2）单核细胞： 原始单核细胞为阴性反应， 幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性反应，颗粒细小，弥散分布。 ;（3）其他细胞 淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细 胞、巨核细胞均呈阴性反应。 （4）血小板过氧化物酶 主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可作为原巨核细胞的一种标志物，有助于FAB M7的识别。;（5）过氧化物酶染色 主要用于鉴别急性白血病类型， 急性髓细胞白血病多呈阳性反应，以M3和M2型反应最强，MI和M5型反应较弱， 故有助于区别M3和M5型。 急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，故为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重要指标。;;;;二、苏丹黑B染色;【试剂】 1. 10%甲醛液。 2. 苏丹黑B乙醇溶液;【操作】 1．干燥血片或骨髓片在甲醛蒸气中固定。 2．自来水冲洗。 3．放人染色液中，37 ℃染色30~60min。 4．用70%乙醇脱色1~2min，水洗lmin。. 5．瑞氏染液复染20~30min。; 【结果】 脂类呈黑色或棕黑色颗粒，定位于细胞浆中 （+） 颗粒很小，细小、稀疏，或胞质局部面积的1/4有致密的颗粒。 （++）颗粒较少，或胞质面积的1/2出现黑色颗粒。 （+++）颗粒较密，或胞质面积的3/4出现黑色颗粒。 （++++） 颗粒极密，颗粒间无间隙。 ;【临床意义】 1. 粒细胞系 早幼粒及以下阶段随着细胞成熟，阳性颗粒逐渐增加。 早期原粒细胞一般为阴性，少数细小点状颗粒代表线粒体被染色 晚期原粒细胞可出现阳性颗粒，其颗粒限于胞浆的某一区域。 ;2. 单核细胞系 阳性，颗粒细小，分布弥散，形状不规则。原单核细胞为阴性。 3．红细胞系、淋巴细胞系均呈阴性反应 4．尼曼一匹克细胞和戈谢细胞均为阳性反应。 ; 5．苏丹黑B和过氧化物酶染色临床意义相似，主要用于急性白血病类型的鉴别。 苏丹黑B染色较过氧化物酶染色更敏感，但特异性不如过氧化物酶染色（极少数急性淋