蛋白质核酸沉淀杨综述.pptVIP

3、钙盐沉淀法 核酸提取液 10%氯化钙 钙盐形式 1/5体积的乙醇 DNA钙盐沉淀 4、选择性溶剂沉淀法 ①在核酸提取液中加入氯仿/异戊醇或氯仿/辛醇，振荡一段时间，使蛋白质在氯仿/水界面上形成凝胶状沉淀而离心除去，核酸仍留在水溶液中。 ②在对氨基水杨酸等阴离子化合物存在下，核酸的苯酚水溶液提取液中，DNA和RNA都进入水层，而蛋白质沉淀于苯酚层中被分离除去。 ③在DNA与RNA的混合液中，用异丙醇选择性地沉淀DNA而与留在溶液中的RNA分离。 * “陈化”处理（小晶体溶解，大晶体生长） * * * * * 早在1859年，中性盐盐析法就被用于从血液中分离蛋白质，随后又在尿蛋白、血浆蛋白等的分离和分级中使用，得到了比较满意的结果。 在蛋白质溶液中加入中性盐后会压缩扩散双电层、降低ζ电位，即中性盐既会使蛋白质脱水，又会中和蛋白质所带电荷，使颗粒间的相互排斥力失去，在布朗运动的互相碰撞下，蛋白质分子结合成聚集物而沉淀析出。 * 图7 pH4.8时人白蛋白在乙醇-水溶液中的 * 方法二 各级均离心分离沉淀物，将沉淀溶于2倍体积的缓冲液中，测定其中总蛋白和目标蛋白浓度 以饱和度为横坐标，总蛋白和目标蛋白浓度为纵坐标，得到蛋白质溶解度曲线 蛋白质量(mg)或酶活力 硫酸铵饱和度％ 蛋白质量(mg)或酶活力 硫酸铵饱和度％ KS分段盐析法