第三章第二节微生物发酵产酶.pptVIP

3、提高酶产量的措施 添加诱导物 对于诱导酶的发酵生产，在发酵过程中的某个适宜的时机，添加适宜的诱导物，可以显著提高酶的产量。例如，乳糖诱导β-半乳糖苷酶，纤维二糖诱导纤维素酶，蔗糖甘油单棕榈酸诱导蔗糖酶的生物合成等。 诱导物一般可以分为3类 酶的作用底物 酶的催化反应产物 作用底物的类似物 控制阻遏物的浓度 阻遏作用根据机理不同，可分为：产物阻遏和分解代谢物阻遏两种。 1.产物阻遏作用是由酶催化作用的产物或者代谢途径的末端产物引起的阻遏作用。 2.分解代谢物阻遏作用是由分解代谢物（葡萄糖等和其它容易利用的碳源等物质经过分解代谢而产生的物质）引起的阻遏作用。 控制阻遏物的浓度是解除阻遏、提高酶产量的有效措施。 枯草杆菌碱性磷酸酶的生物合成 为了减少或者解除分解代谢物阻遏作用，应当控制培养基中葡萄糖等容易利用的碳源的浓度。 采用其他较难利用的碳源，如淀粉等 采用补料、分次流加碳源 添加一定量的环腺苷酸（cAMP） 对于受代谢途径末端产物阻遏的酶，可以通过控制末端产物的浓度的方法使阻遏解除。 添加表面活性剂 表面活性剂可以与细胞膜相互作用，增加细胞的透过性，有利于胞外酶的分泌，从而提高酶的产量。 将适量的非离子型表面活性剂，如吐温（Tween）、特里顿(Triton)等添加到培养基中，可以加速胞外酶的分泌，而使酶的产量增加。 由于离子型表面活性剂对细胞有毒害作用，尤其是季胺型表面活性剂（如‘新洁而灭’等）是消毒剂，对细胞的毒性较大，不能在酶的发酵生产中添加到培养基中。 添加产酶促进剂 产酶促进剂是指可以促进产酶、但是作用机理未阐明清楚的物质。例如，添加一定量的植酸钙镁，可使霉菌蛋白酶或者桔青霉磷酸二酯酶的产量提高1～20倍；添加聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol）可以提高糖化酶的产量。产酶促进剂对不同细胞、不同酶的作用效果各不相同，现在还没有规律可循，要通过试验确定所添加的产酶促进剂的种类和浓度。 第二节 常见产酶微生物 Common microorganism in Enzyme Production 用于酶生产的微生物特点 酶产量高 容易培养和管理 产酶稳定性好 利于酶分离纯化 安全可靠无毒性 筛选、诱变、基因克隆等技术。并及时复壮 微生物易于与杂质分离、易于与酶分离 不对人体、环境产生影响；不对酶的应用产生影响 基本要求： 不是致病菌 发酵周期短，产酶量高 不易变异退化 最好是产生胞外酶的菌种,利于分离。 对医药和食品用酶,还应考虑安全性： 凡从可食部分或食品加工中传统使用的微生物生产的酶,安全! 由非致病微生物制取的酶，需作短期毒性实验。 非常见微生物制取的酶，需做广泛的毒性实验，包括慢性中毒实验。 一、细菌 (1) 大肠埃希氏杆菌(Escherichia coli)，简称为大肠杆菌，是最为著名的原核生物。 形态：短杆或长杆状，0.5～1.0×1.0～3.0 um，革兰氏阴性，运动(周毛)或不运动，无芽孢，一般无荚膜。菌落呈白色至黄白色，扩展，光滑，闪光。 Escherich属菌株和大多数大肠杆菌是无害，但也有些大肠杆菌是致病的，会引起腹泻和尿路感染。 大肠杆菌的名声主要因它易于在实验室操作、生长迅速，而且营养要求低。 应用： 大肠杆菌能作为宿主供大量的细菌病毒生长繁殖 大肠杆菌也是最早用作基因工程的宿主菌 工业上生产谷氨酸脱羧酶、天冬酰胺酶和制备天冬氨酸、苏氨酸及缬氨酸等 测谷氨酸含量等 对白血病有显著疗效 (2)枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 直状、近直状的杆菌，周生或侧生鞭毛，革兰氏阳性，无荚膜，芽孢0.5×1.5?1.8?m，中生或近中生。 枯草芽孢杆菌是工业发酵的重要菌种之一。生产淀粉酶、蛋白酶、5’-核苷酸酶、某些氨基酸及核苷。 二、放线菌 具有分枝状菌丝的单细胞原核微生物。革兰氏阳性，菌丝有气生菌丝和基内菌丝之分。常用于酶生产的主要为链霉菌。 应用：主要生产葡萄糖异构酶，还可生产青霉素酰化酶、纤维素酶、碱性蛋白酶、几丁质酶等。 三、霉菌 分类学上属于藻状菌纲，毛霉目，根霉属。 根霉因有假根（Rhizoid）而得名（假根的功能是在培养基上固着，并吸收营养）。 分布于土壤、空气中，常见于淀粉食品上，可引起霉腐变质和水果、蔬菜的腐烂。 (1) 根霉(Rhizopus) 代表种 米根霉（R.oryzae)黑根霉(R.nigrican)等。 应用 根霉能产生一些酶类，如淀粉酶、果胶酶、脂肪酶等，是生产这些酶类的菌种。在酿酒工业上常用做糖化菌。有些根霉还能产生乳酸、延胡索酸等有机酸。 (2)曲霉(Aspergillus) 分类：多数属于子囊菌亚门，少数属于半知菌亚门。 分