雷帕霉素对STZ致糖尿病幼年大鼠肾脏NFκB与MMP9表达影响.pdfVIP

摘要 摘要? 背景及目的 儿童和青少年糖尿病 95%为 1 型糖尿病（T1DM），主要是由于胰岛素分泌 的绝对缺乏造成的，必须使用胰岛素治疗，所以又称胰岛素依赖型糖尿病 （IDDM）。糖尿病肾病是糖尿病严重的慢性微血管并发症之一。大约有 30%-60% 的 T1DM 患者在 10-20 年内出现微量蛋白尿，并在出现微量蛋白尿 15-20 年后发 展为慢性肾功能衰竭，严重威胁人类的健康。控制血糖及血压并不能完全阻止 糖尿病各种并发症的发生与发展。近年来研究发现，细胞外基质重塑是糖尿病 肾脏病理变化的主要机制之一。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路、 生长因子、氧化应激、炎性反应等均参与了糖尿病肾小球内细胞外基质合成及 足细胞损伤过程。而金属基质蛋白酶（MMPs）作为体内最重要的降解细胞外基 质的酶类也参与了糖尿病肾病的发展。细胞外基质的合成和降解平衡失调最终 造成了肾脏细胞外基质重塑。本实验以链脲佐菌素（STZ）致糖尿病的幼年 SD 大鼠为模型，探讨肾脏的炎性反应与金属基质蛋白酶-9（MMP9）表达之间的关 系；并用 mTOR 蛋白特异性抑制药——雷帕霉素干预，研究雷帕霉素是否可以 通过抑制炎症反应、抗 ECM 堆积等方面减轻糖尿病大鼠肾损害。 方法 1．模型的建立及实验的分组：雄性 SD 大鼠，适应性喂养 1 周，随机分为 正常对照组 10 只，造模组 20 只，腹腔注射 STZ，剂量为 70mg/Kg。注射 STZ 后第 3 天尾静脉采血测血糖，以随机血糖值≥16.7mmol/L 为达到成模标准。未 达标大鼠再追加 50mg/kgSTZ，并在 3 天后复测血糖，不达标大鼠淘汰。造模成 功后再随机分为糖尿病模型组（D）及雷帕霉素干预组（R）各 10 只。R 组给予 腹腔注射雷帕霉素 1mg/Kg·2d，持续 4 周；C、D 组腹腔注射同等体积的生理盐水， 持续 4 周。 2．标本的收集：3 组大鼠于第 6 周末处理，首先放入代谢笼收集 24 小时尿， 后心脏取血并保存，取肾脏制备组织切片。 3．检测指标：血糖试纸采血，用罗氏血糖仪检测随机血糖。电子天平测体 重及双肾质量，计算肾指数（KWI）。全自动生化分析仪检测血清尿素氮、肌酐 II 万方数据 摘要 III 及尿液蛋白浓度。24 小时尿蛋白＝尿蛋白浓度×24 小时尿量。肾组织切片行 HE 染色及 MMP9、NF-κBp65 免疫组化检测。 结果 1．雷帕霉素干预组大鼠及糖尿病模型组大鼠血糖差异无统计学意义（P＞ 0.05）；糖尿病模型组及雷帕霉素干预组大鼠 KWI 大于正常对照组（P＜0.01）， 雷帕霉素组大鼠 KWI 小于糖尿病模型组（P＜0.01）。 2．各组大鼠血清 BUN、Scr、24Upro 比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。 而雷帕霉素干预组血清 BUN、Scr、24Upro 三者均低于糖尿病模型组，差异均 有统计学意义（P＜0.05）。 3．各组大鼠肾脏 NF-κB、MMP9 表达比较差异有统计学意义（P＜0.01）。 雷帕霉素干预组肾脏 NF-κB 表达低于糖尿病模型组（P＜0.01）。雷帕霉素干预 组肾脏 MMP9 表达高于糖尿病模型组（P＜0.01）。 4．HE 染色镜检：糖尿病模型组大鼠表现为系膜细胞增生，系膜基质扩张， 基底膜增厚，肾小管肿胀，管腔狭窄，雷帕霉素干预组亦有上述表现，但程度 明显较轻。 5．KWI、24Upro 与肾脏 MMP9 的表达均呈现负相关(相关系数分别为 r=－ 0.786, －0.731 )。 6．肾脏 MMP9 与 NF-κB 表达呈现负相关（相关系数 r＝－0.722）。 结论 1．雷帕霉素对 STZ 致糖尿病幼年大鼠肾脏具有保护作用，本实验主要表现 在：减轻糖尿病大鼠的肾脏肥大；降低血肌酐、尿素氮；减少尿蛋白。 2．雷帕霉素可以减少 STZ 致糖尿病幼年大鼠的肾脏 NF-κB 表达，抑制炎 症反应，减轻炎症反应对肾脏的损害。 3．雷帕霉素可以增加 STZ 致糖尿病幼年大鼠的肾脏 MMP9 的表达，增加 对细胞外基质的降解，从而减轻肾小球硬化、纤维化。 关键词：雷帕霉素；糖尿病肾病；核转录因子-κB；金属基质蛋白酶-9 万方数据 ABSTRACT ABSTRACT Background and objective: Type 1 Diabetes mellitus (T1DM) accounts for about 95% of childhood and juvenile diabetes, is characterized by low or absent levels of endogenously produced insulin a