TAK1siRNA对类风湿性关节炎患者滑膜细胞MMP1和TNFa表达影响.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要??．．?．．．?．．??．．．．．??．?．．．．?．．．．．1 英文论著摘要????．?．．．??．????????．．4 二、英文缩略语??????????????????7 三、论文 前言??．?．．．．．?．．????．．??．．．?．．????8 实验材料与方法．?．?．．???????．．?．．．???．．9 实验结果??????????????????．12 讨论?．??????????????????．16 结论?．．??．．．?．．????．?．????．．．．?．．．．17 四、本研究创新性的自我评价??．????????．???18 五、参考文献??．．．????．．??????????．．19 六、附录 综述????．．??．?．．．??．．????????21 在学期间科研成绩．．??????．．??．．．?．????29 致谢???????????????????．．30 个人简介?????．????．．??．．．?．????31 万方数据 ·中文论著摘要· TAKlsiRNA对类风湿性关节炎患者滑膜细胞 MMPl和TNF．a表达的影响 刖 吾 类风湿性关节炎(rta)是一种慢性进行性的自身免疫性疾病，它严重地威胁着 人类的健康。近些年来已经发现RA滑膜细胞在类Jxl湿关节炎发病中发挥着主要 的作用，特别是它分泌的一些细胞因子。这些炎性因子之间相互作用，促成关节 炎症的逐渐加重。 作为MAP3K家族的1个成员，转化生长因子p激活激酶(TAKl)已经被证明 是炎症反应里细胞信号传导中很重要的激酶，而且可能在类风湿性关节炎中起着 较为重要的作用。首先TAKl激活IKK后使NF．kB进入细胞核中并参与基因转录， 作为转录因子，NF．K B，AP一1可以上调类风湿性关节炎发病中的多种基因产物，例 如环氧化酶2(COX．2)和基质金属蛋白酶(MMPs)等细胞因子。我的研究所在课题 的先期成果验证了转化生长因子D激活激酶在类风湿性关节炎病人滑膜中有着较 高水平的表达，可以推断阻断TAKl可能会助于降低类风湿性关节炎关节和滑膜 中炎性因子的影响，选择类风湿性关节炎的基因治疗中的靶基因可以考虑TAKl。 在关节软骨中降解聚蛋白多糖和胶原的主要酶类被证明是是基质金属蛋白酶 (MMP)。MMP家族主要是通过被炎性通路中上游的介质所激活，它们在RA的滑 膜、软骨、滑液中都有显著的增高，并且MMP在RA的诊断中有着重要意义。在 RA发病过程中，增生的B型滑膜细胞有可能在IL．1、TNF．a等细胞因子的刺激 下，合成和分泌酶原形式的MMP．3，继而转化成有活性的MMP3。Okada在1987 年发现，类风湿性关节炎患者关节液中MMP一3，MMP．1和MMP．2都有明显增高， 它们对类风湿性关节炎患者关节破坏明显，并且在早期类风湿性关节炎患者血清 中MMP．1和MMP一2的水平和类风湿性关节炎的活动性、所造成的功能损害表现 出正相关关系。 万方数据 材料与方法 一、实验材料 l、12例标本来源：中国医科大学附属第一医院骨外科住院手术患者(住院时间 2012年11月?2013年2月)。以上手术患者诊断都符合美国风湿病学会1987年 提出的RA诊断标准，术前均已经过伦理学认证通过。 2、免疫组化染色试剂盒 3、DharmaFECT siRNA转染试剂盒 4．ELISA试剂盒 二、实验方法 1、细胞培养 RA患者滑膜细胞进行培养，用于实验或传代。 2、细胞鉴定 将培养至三代的滑膜细胞进行免疫组化鉴定： (1)取贴满细胞的盖玻片，用10％甲醛溶液固定30min，晾干， (2)用PBS冲洗三次，再加入3％H202 5．10min，PBS冲洗，再加入『F常善 养血清，于室温静置10—15min，倾去，勿洗，甩干后，加一抗过夜， (3)滴加辣根过氧化物酶，于室温孵育10min，PBS冲沈3x3min，用DAB 显色，当显色完全后复染，脱水，封片。 3、细胞转染 严格按照试剂说明书规定，将滑膜细胞随机分组后，进行细胞转染。 4、ELISA检测 5、统计学分析 实验结果 本研究发现：运用转染技术抑制转化生长因子B激活激酶(TAKI)在类风湿 关节炎滑膜细胞中的表达后，可发现MMPl和TNF—a的表达有不同程度的降低。 结论 在类风湿关节炎患者滑膜细胞中转染TAKlslRNA后，可以抑制MMPl和 2 万方数据 TNF．a的表达。 关键词 类风湿关节炎；MMPl，TNF．a，TAKl。 3 万方数据 ·英文论著摘要· Effects of takl on gene expression of Matrix metaHoproteinasel and Tnf仅in RA patients fibroblast syn