香豆素分析.pptVIP

* 游离香豆素类成分大多为无色至淡黄色结晶状的固体，有比较敏锐的熔点。 分子量小的游离香豆素多具有芳香气味与挥发性，能随水蒸气蒸馏，并能升华。香豆素苷类一般呈粉末或晶体状，多数无香味和挥发性，也不能升华。 游离香豆素类溶于有机溶剂，如氯仿、乙醚、醋酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇等。也能溶于沸水，但不溶于冷水。 香豆素苷类易溶于甲醇、乙醇，可溶于水，难溶于乙醚、氯仿、醋酸乙酯等有机溶剂。 * * 这是因为该类化合物分子结构中具有α-、β-不饱和酮与较长的共轭双键体系相连的缘故。 香豆素母核上带来不同的取代基及取代位置不同，能显著的影响到荧光的强度和颜色。如C6位具有含氧取代基（-OCH3、-OH等）的香豆素，其荧光较强，甚至在日光下就能看到荧光，如秦皮甲素和乙素等。 但具有荧光的化合物不一定都是香豆素，如咖啡酸、绿原酸等在UV下也能呈现蓝色荧光，二氢黄酮则呈天蓝色荧光。 此外，个别的香豆素类化合物（如双香豆素）不产生荧光。 * 因香豆素类成分大都具荧光，含香豆素类中药提取物，在硅胶板上的色谱指纹图具一定的鉴别意义，可用化学对照品对照；即使在没有标准品的情况下，也可以使用经准确鉴定学名的标准药材做对照品，若待测样品与对照品的指纹图一致，再结合适当的显色剂就可确定样品是否与对照品同类。 * * * 硅胶薄层色谱常用的展开系统有： 氯仿； 含1.5%乙醇氯仿； 乙醚- 苯（1：1）； 乙醚- 苯- 10%乙酸（1：1：1）等 * 2、应用实例 白芷的薄层定性分析 取白芷粉末0.5g，加乙醚10ml，浸泡1h，时时振摇，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。 吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（30~60℃）- 乙醚（3：2）为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点。 第三节 香豆素定量分析 含香豆素成分的中药定量测定方法有比色法、荧光法、极谱法、紫外分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等。 每种方法都有其特点，有的简单，有的操作麻烦，有的则需要一定的仪器设备。 相比之下，因该类成分多具有较强的荧光，故可荧光分光光度法进行定量分析；薄层扫描法测其紫外吸收或荧光的方法较简便快速，兼有分离功能，应用日趋普遍；近年来又有了分离效率较高的高效液相色谱技术，对复杂的中药样品更为合适。 * 一．荧光分光光度法 香豆素类化合物在紫外光的照射下显蓝色荧光，可用荧光分光光度法测定。如 7- 羟基香豆素和香豆素混合物的测定，前者用370nm激发，在450nm测定，浓度为1~10μg／ml时荧光与浓度成线性失系。后者用361nm激发，在491nm测荧光。 如果香豆素7位上有乙氧基（代谢产物）可使其变为7- 羟基香豆素用390nm激发，440nm测定。 1、应用概况 * 2．应用实例 （1）佛手油中的香豆素分析 可用硅胶GF254薄层分离，以己烷- 醋酸乙酯（3：1）展开，分出4个荧光点即：柠美内酯（Citropten）Ⅰ；5- 牻牛儿氧基-7-甲氧基香豆素（5-geranyloxy-7-methydroxycoumarin）Ⅱ；佛手内酯Ⅲ和佛手柑亭（bergamottin）Ⅳ，可直接在薄层上进行荧光测定，对于Ⅰ和Ⅱ用330nm激发，424nm测定荧光，Ⅲ和Ⅳ用272nm激发，520nm测定。 * 二．薄层色谱法 1．荧光扫描法测定蛇床子中蛇床子素含量 精密称取在P2O5干燥器中减压干燥至恒重的蛇床子粉末1g，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇20ml，振摇后放置过夜，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。另取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙醇制1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。 精密吸取上述两种溶液各1μl，分别交叉点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以苯- 乙酸乙酯（30：1）为展开剂，展开，取出，晾干。 照薄层色谱法进行荧光扫描，激发波长λX365nm，测量供试品与对照品荧光强度积分值. 本品含蛇床子素（C15H16O3）不得少于1.0％ 。 * 2．紫外光区扫描法测定独活中蛇床子素含量 取独活粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醇20ml，超声处理30min，放冷，滤过，滤液置25ml量瓶中，用少量乙醇分次洗残渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含1