AQP1表达对Balbc3T3成纤维细胞自噬影响.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要??????????????????????????1 英文论著摘要??????????????????????????3 二、英文缩略语???????????????????????????5 三、论文 —1上．——L 日U百??????????????????????????????6 材料与方法???????????????????????????7 结果??????????????????????????????9 讨论??????????????????????????????12 结论??????????????????????????????13 四、本研究创新性的自我评价?????????????????????14 五、参考文献????????????????????????????15 六、附录 综述??????????????????????????????17 在学期间科研成绩????????????????????????24 致谢??????????????????????????????25 个人简介????????????????????????????26 ·中文论著摘要· AQPl的表达对Balb／c 3T3成纤维细胞自噬的影响 目 的 水通道蛋白(Aquaporin)是广泛分布于动物、植物、微生物内具有调节水跨 膜转运作用的通道。近年来有研究显示水通道蛋白除转运水以外，尚可作为02、 C02、NO等通过细胞膜的通道，并可受到渗透压、低氧、能量代谢等多种因素的 调节。本研究应用特异性靶向干扰水通道亚型水通道蛋白1(AQPl)表达基因的 siRNA(short interfering RNA)，抑制Balb／c 3T3成纤维细胞的AQPl表达，并通 过检测碘乙酰胺(iodoacetamide，IA)对这种AQPl表达受抑制的细胞所造成的 自噬标记物(LC3)表达量的变化，初步探讨AQPl与细胞自噬之间的关系。 方法 1、利用siRNA转染技术阻断Balb／c 3T3成纤维细胞中AQPl的表达，应用 Western．Blot法检测AQPl表达量的变化。 2、利用siRNA转染技术阻断Balb／c 3T3成纤维细胞中AQPl的表达，再使 用碘乙酰胺造成细胞能量缺乏，模拟细胞内低氧环境，Western-Blot检测自噬标记 物LC3表达量的变化。 结果 l、利用siRNA转染技术阻断Balb／c 3T3成纤维细胞中AQPl的表达，应用 Western-Blot法验证，结果表明，AQPl．siRNA组AQPl表达较未处理细胞组减少 92．86％，较Non-Targeting siRNA组减少90．68％。 2、抑制Balb／c 3T3成纤维细胞AQPl基因，应用30nM IA刺激细胞，造成细 胞能量缺乏，模拟低氧环境。4小时后显微镜下观察细胞形态可见细胞明显变圆、 皱缩，此时检测自噬标记物LC3．II表达显著上调，与对照组相比增加了50．49％； 6小时候细胞大量死亡，同时检测LC3．II的表达情况，与4小时比略有下降，与 对照组相比增加了36．50％。 讨论 细胞AQPl功能受阻后，会造成细胞内ROS的蓄积， ROS如果得不到清除 就会攻击细胞的蛋白质、脂质、DNA等生物大分子，导致一系列氧化损伤，因此 细胞激活自噬活动，保护细胞免受ROS的攻击，维持细胞内环境的稳态。当然， 除此之外可能尚有其它原因导致细胞自噬的激活，需进一步实验证实。 结论 应用siRNA技术可以使Balb／c 3T3成纤维细胞AQPl基因沉默，使AQPl的 表达量显著降低。 在能量缺乏条件下，AQPl的表达可能与细胞自噬活动有关 关键词 低氧；水通道蛋白1；自噬 2 ·英文论著摘要· Effects ofAquaporin·-1 Expression on Autophagy in Balb／c 3T3 Fibroblast Obj ective Aquaporin proteins are a family of transmembrane channel proteins that selectively facilitate movement of water molecules．They are widely distributed in animals，plants and microorganisms．In recent years，studies have shown that the Aquaporin proteins also function as transmembrane transport channels for 02，C02，NO，and Can be regula