蛋白质药物聚乙二醇修饰技术简介解决方案.pptVIP

* 工作总结及QC岗位技能学习 汇报人：刘彬彬 华侨大学 生物化工 硕士 * 药物合成工作总结 药物聚乙二醇修饰技术及质量控制 化工原料及产品分析方法建立步骤 01 02 03 目录 CONTENTS * 02 聚乙二醇修饰技术及质量控制 * 蛋白质药物聚乙二醇化意义 * 聚乙二醇修饰时应注意的问题 修饰剂的水解稳定性和反应活性； 蛋白质的修饰位点，修饰剂与蛋白质上的残基之间的反应类型和专一性； 要求的修饰度； 修饰剂与蛋白质的连接键的稳定性、毒性、抗原性； 修饰后是否易于分离、纯化； 是否适于建立快速、方便的分析方法； 修饰剂是否能够简便经济地合成或购买。 * 聚乙二醇修饰剂质量控制 应当考虑聚乙二醇修饰剂的端基取代率和纯度，药物修饰用的聚乙二醇修饰剂其端基取代率和纯度都要求至少在90%以上； 要关注其分子量分布系数，应尽可能采用分散度窄的产品，目前建议分散度至少控制在1.10以内（1.05左右为佳）； 应注意聚乙二醇修饰剂批间分子量的一致性，有时候分子量的批间差异对产品性能的影响甚至要大于分散度对产品性能的影响； 要关注聚乙二醇修饰剂本身的稳定性，因为在贮存、分装和生产过程中，高温、氧化和潮解都可能使其活化基团失活，从而导致修饰效率大大降低。 * 常用分析仪器原理及使用 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（Maldi-Tof-MS） 高效液相色谱（ HPLC） 气相色谱（ GC） 凝胶渗透色谱（GPC） 紫外可见吸收光谱（UV） 红外光谱（ IR） QC实验室常用仪器: * Maldi-Tof 质谱分析技术 田中耕一（日本） 约翰·贝内特·芬恩（美国） 2002年诺贝尔化学奖 发展对生物大分子进行鉴定和结构分析的方法，建立了软解析电离法对生物大分子进行质谱分析。 * Maldi-Tof 质谱原理 Maldi-Tof 中基质的作用 Maldi-Tof 质谱分析技术 1、把样品分子彼此分开，削弱样品分子之间的作用力； 2、基质吸收激光能量，并将部分能量传递给样品； 3、帮助样品离子化。 * Maldi-Tof 质谱应用 检测糖蛋白 * Maldi-Tof 质谱应用 检测核酸 * Maldi-Tof 质谱应用 检测聚合物 * Maldi-Tof 质谱应用 检测小分子药物 Sample (exp. Mass=448.1Da). Matrix: DHB * Maldi-Tof 质谱应用 鉴定和分类微生物 * 高效液相色谱（HPLC）原理 基本原理：溶于流动相（mobile phase）中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationary phase）发生作用（吸附，分配，离子吸引，排阻，亲和）的大小，强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。 特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。 * 高效液相色谱（HPLC）系统组成 * 高效液相色谱（HPLC）系统组成 * 高效液相色谱（HPLC）流动相 HPLC 流动相类别： 1、按流动相组成分：单组分和多组分； 2、按极性分：极性、弱极性、非极性； 3、按使用方式分：等度洗脱和梯度洗脱。 梯度洗脱 可提高柱效的方法 1、除去柱上端固定相变色部分 (约3mm左右)，再补充新的固定相。 2、色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效将明显下降，选合适的溶剂进 行洗净。 3、采用梯度洗脱时，柱在重复使用前，用泵把几倍于柱体积的起始 溶剂压经柱子，以重新建立起始的平衡来得到再生。 * 仪器维护流程图 吸滤头 单向阀 柱塞密封圈 线路过滤器 进样器 检测器 * 气相色谱（GC）原理图 * 气相色谱（GC）常见问题 为什么程序升温可以更好的实现混合物的分离？ 恒温气相色谱的柱温恒定在试样平均沸点，如试样的沸程很宽，则低沸点组分因柱温太高而色谱峰窄，相互重叠，而高沸点组分又因柱温太低，洗出很慢，有些甚至不能洗出，如果采用程序升温，采用足够低的初始温度，低沸点组分最先洗出，得到很好分离，随着柱温升高，较高沸点的组分也能较快洗出，得到良好的峰形。 气谱峰的拖尾与哪些因素有关？如何消除？ 与载体、样品类型、进样量等因素有关。样品含脂肪烃、芳香烃、烯烃等成较弱的拖尾；含羟基、羧基的醇、酸等严重拖尾。进样量小，拖尾弱，进样量大，拖尾严重。应尽量减少进样量，形成衍生物以消除气谱峰的拖尾。 * 使用气相色谱（GC）注意事项 综上所述，使用仪器时，应注意： 1、样品要进行净化，提纯； 2、进样量要控制在一定范围内； 3、进样要迅速； 4