第09章RNA的生物合成(转录)要点.ppt

tRNA核苷酸转移酶、连接酶 ATP ADP 目 录 碱基修饰 （2）还原反应 如：U ? DHU （3）核苷内的转位反应 如：U ? ψ （4）脱氨反应 如：A ? I 如：A ? Am （1）甲基化 （1） （1） （3） （2） （4） 目 录 三、rRNA的转录后加工 纵列串联基因：可转录的DNA片段与不能转录的间隔区串联组成的基因。（基因间隔） 高度重复序列：间隔区和可转录区可以重复数百个到数千个以上，每重复一次构成一个重复单位，转录一个rRNA，而且每个重复单位转录的rRNA大小基本一致，45S r RNA。 丰富基因：具有高度重复序列的基因，称之。rDNA，5s rRNA基因，组蛋白基因，免疫球蛋白 rRNA基因（rDNA）的特点: 转录 45S - rRNA 剪接 18S - rRNA 5.8S和28S-rRNA rDNA 内含子 内含子 28S 5.8S 18S 四、核 酶 具有酶促活性的RNA称为核酶。 核酶 ribozyme 四膜虫rRNA内含子的二级结构 四膜虫rRNA的剪接采用自我剪接（核酶）方式。 rRNA前体（35S）, 内含子（9S）414核苷酸 5′-端核苷酸序列 pG-OH ppG-OH, pppG-OH U-OH GpU pGpA 第一次转酯反应 第二次转酯反应 UpA GpU 外显子1 内含子 外显子2 G-OH UpU pGpA ④二次转酯反应 twice transesterification I类内含子 目前研究最多的核酶是 小分子RNA核酸内切酶家族: 锤头核酶, 发夹核酶,丁肝病毒等. 底物部分 核酶的结构特点： 通常由60个核苷酸左右组成， 底物部分：含有GU序列 催化部分：锤头结构, 3个茎, 1-3个环 保守序列：13个碱基 人工设计的核酶 黄线表示合成的核酸分子 细线表示天然的核酸分子 X 表示一致性序列 箭头表示切断点 目 录 核酶研究的意义 核酶的发现（Cech和Altman）1989诺贝尔化学奖； 核酶的发现是对传统酶学的挑战； 利用核酶的结构设计合成人工核酶 。 澳大利亚Adelaide大学Symons实验室： 人工合成一个13寡聚核糖核苷酸 一个天然41寡聚核苷酸（类病毒RNA） 在体外实验中可以形成锤头结构 天然的41寡聚核苷酸水解：9，32个核苷酸两片段 已合成切割H-ras肿瘤基因的核酶， 通过电穿孔的方法导入人黑色素瘤细胞， 可以改变肿瘤的表型。 建立切割HIV-1病毒RNA核酶的细胞模型。 * 茎环结构终止转录的机理 使RNA聚合酶变构，转录停顿； 末端polyU 使转录复合物趋于解离，RNA产物释放。 5′pppG 5? 3? 3?5? RNA-pol 二、真核生物的转录起始 （一）转录起始 转录起始上游区段比原核生物多样化，转录起始时，RNA-pol不直接结合模板的启动子，其起始过程比原核生物复杂。 转录起始点 -25bpTATA盒 CAAT盒 GC盒 增强子 顺式作用元件 cis-acting element ： DNA分子上可影响（调控）转录的序列。 启动子，增强子，沉默子。 1. 转录起始前的上游区段: AATAAA 切离加尾 转录终止点 修饰点 外显子 翻译起始点 内含子 OCT-1 OCT-1：ATTTGCAT八聚体 2. 转录因子 transcriptional factors, TF 能与顺式作用原件识别、结合，调节真核基因转录的蛋白质，称为转录调节因子，简称转录因子。 反式作用因子 trans-acting factors trans-分子外 顺式作用元件 cis-acting factor cis-分子内 基本转录因子 （TFⅠ，TFⅡ，TFⅢ） 直接或间接参与RNA聚合酶与启动子结合的转录因子 特异转录因子： 特异调节各个基因转录的转录因子，决定该基因的时间，空间特异性表达。 3. 转录起始前复合物 pre-initiation complex, PIC 真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子。 POL-Ⅱ TFⅡF ⅡA ⅡB 由RNA-Pol Ⅱ催化转录的PIC POL-Ⅱ TFⅡF ⅡH ⅡE TBP TAF TFⅡD-ⅡA-ⅡB-DNA复合物 TATA ⅡA ⅡB TBP TAF TATA ⅡH ⅡE CTD- P PIC组装完成，TFⅡH使CTD磷酸化 （二）转录延长 RNA-pol前移,核小体移位和解聚现象。 体外转录实验: 移位 DNA酶水解法, 200 bp及其倍数的电泳区带, 被组蛋白保护。 细胞转录实验：解聚 组蛋白精氨酸乙酰化，降低正电荷。 DN