第八章分子生物学要点.ppt

第八章 真核生物基因表达调控 RNA水平 转录水平调控 RNA的转录后加工 mRNA向胞浆转运 DNA水平 基因重排 甲基化修饰 染色质的结构状态 蛋白质水平 mRNA稳定性 翻译过程 翻译后加工 蛋白质的稳定性 真核生物基因表达调控的环节多 基因丢失 基因扩增 一、DNA水平的调控 1. 基因丢失： 丢失一段DNA或整条染色体的现象。 在细胞分化过程中，可以通过丢失掉某些基因而去除这些基 因的活性。某些原生动物、线虫、昆虫和甲壳类动物在个体 发育中，许多体细胞常常丢失掉整条或部分的染色体，只有 将来分化产生生殖细胞的那些细胞一直保留着整套的染色体。 目前，在高等真核生物（包括动物、植物）中尚未发现类似 的基因丢失现象。 马蛔虫受精卵的早期分裂 马蛔虫2n＝2，但染色体上有多个着丝粒。第一次卵裂是横裂，产生 上下2个子细胞。第二次卵裂时，一个子细胞仍进行横裂，保持完整 的基因组，而另一个子细胞却进行纵向分裂，丢失部分染色体。 生殖细胞 体细胞 四膜虫： 大核： 营养核 可转录 小核： 生殖核 无转录活性 大核由小核发育而来，发育过程中有多处染色质断裂，并删 除约10%的基因组DNA。被删除序列的存在可能抑制了基因 的正常表达。 2. 基因扩增： 通过改变基因数量来调节基因表达产物的水平 非洲爪蟾卵母细胞: 为储备大量核糖体以供卵细胞受精后发育的需要，通 常都要专一性地增加编码核糖体rRNA的基因（rDNA） rDNA的滚环复制： 拷贝数由1500→2×106，总量可达细胞DNA的75%， 当胚胎期开始后，所合成的rDNA失去需要而逐渐降解 消失。 3. 基因重排--- 免疫的多样性 在胚胎细胞中，V、J、（D）和C基因是分散排列的，在B细 胞发育成熟过程中，基因组中组成免疫球蛋白分子的各个基 因开始发生重排，转录产生mRNA。随机重排的结果可以产 生108—10l0种免疫球蛋白分子。 二、转录水平的调控 活跃转录的基因全部位于常染色质中，处于异染色质的 基因则不表达。 主要发生在转录起始时的调控（包括启动子的活化和转 录复合体与mRNA的结合）。 1. 启动子的活化 DNA的甲基化：主要发生在胞嘧啶（C），抑制基因表达。 高等生物中的甲基化主要是多核苷酸链的CpG岛上胞嘧 啶的5位碳原子，生成m5CpG。DNA的不同甲基化状态 (过甲基化与去甲基化)与基因的活性和功能有关。 DNA甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶（5-mC）和少量的 N6-甲基嘌呤（N6-mA）及7-甲基鸟嘌呤（7-mG）。 甲基化抑制基因转录的机制 DNA 甲 基 化 导 致 某 些 区 域 DNA构象变化，从而影响蛋 白质与DNA的相互作用，抑 制基因转录。 DNA甲基化与Cancer 组蛋白的乙酰化：主要发生在Lys，Arg，His，激活基因。 组蛋白乙酰转移酶（histone acetyltransferase，HAT） 组蛋白去乙酰化酶（histone acetylase，HDAC） 组蛋白乙酰化使组蛋白携带正电荷量减少，降低其与 带负电荷的DNA链的亲和性，导致局部DNA与组蛋白 八聚体解开缠绕，从而促使参与转录调控的各种蛋白 因子与DNA特异序列结合，进而发挥转录调控作用； 组蛋白的N末端尾巴可与参与维持染色质高级结构的多 种蛋白质相互作用，更加稳定了核小体的结构。而组 蛋白乙酰化却减弱了上述作用，阻碍了核小体装配成 规则的高级结构。 组蛋白乙酰化激活基因转录的机制 DNA甲基化、组蛋白乙酰化都是表观遗传学的重要内 容之一。 在不影响DNA序列的情况下改变基因组的修饰，这种 改变不仅可以影响个体的发育，而且还可以遗传下去。 因此，这类变异被称为“表观遗传修饰”。 2. 基因调控的顺式作用元件 是指基因周围能与特异转录因子结合而影响转录的DNA序 列。其中主要是起正性调控作用的顺式作用元件，包括启动 子(promoter)、增强子(enhancer)；近年又发现起负性调控 作用的元件---沉默子(silencer)。 哺乳类RNA聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件 增强子：一种能够提高转录效率的顺式调控元件，可使旁侧的基 因转录提高100倍。可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。 增强子 增强子成分 增强子成分 小于100bp 增强子元 增强子元 小于5bp + 特异激活蛋白 促进转录的复合体 + 特异激活蛋白 促进转录的复合体 增强子元 增强子元 小于5bp + 特异激活蛋白 促进转录的复合体 + 特异激活蛋白 促进转录的复合体 增强子增强转录主要是按一种成环模式实现其远距 离、双方向的增强功能。 增强子的作用有以下特点： 增强子提高同一条DNA链上基因转录效率，可以远距离 作用。 增强子作用与其序列的正反方向无关，将增强子方向倒