第四章转录要点.pptx

人工基因组的设计与合成 李炳志 bzli@tju.edu.cn 2014-03 中心法则 复制 温故 知新 第四章 DNA转录 李炳志 bzli@tju.edu.cn 2014-03 第四章 DNA转录 转录的基本概念 原核转录 真核转录 转录后加工 转录 (transcription) 以DNA的一条链为模板合成一条互补的RNA的过程 。 转录 4.1基本概念 不对称转录(asymmetric transcription)： 在DNA分子双链上某一区段，一股链用作模板指引转录，另一股链不转录 。 转录单元：一段被转录成单链RNA的 DNA序列，它起始于启动子，结束于终止子。 转录过程只以基因组DNA中编码RNA（mRNA、tRNA、rRNA及小RNA）的区段为模板。把DNA分子中能转录出RNA的区段，称为结构基因。 转录开始的第一个碱基定义为+1，转录的反方向的序列称为上游，转录方向的序列为下游。 编码链(coding strand)：与模板链相对应的互补链，其编码区的碱基序列与mRNA的密码序列相同（仅T、U互换），也称作Crick（C）链（Crick strand）、正（+）链(plus strand)，或有意义链(sense strand)。 模板链(template strand)：DNA双链中仅有一股链作为模板转录成RNA，也称作Watson（W）链(Watson strand)、负（-）链(minus strand)或反意义链(antisense strand)。 转录主要在临时形成的转录泡（transcription bubble）中进行。 转录的四个阶段 转录可以分为3个阶段：模板识别与起始、延伸和终止。 启动子 启动子是DNA上可以与RNA聚合酶特异性结合并起始转录的部位，一般是一些短的保守序列，位于转录起点附近，可以在上游也可以在下游（非常少）。 启动子有强弱之分，表示与该结构基因转录的强度（多少）。 4.2原核转录 RNA聚合酶 启动子 转录过程 大肠杆菌的RNA聚合酶 E.coli RNA聚合酶由四种类型的亚基组成： a、 b、 b’ 和 s 。 启动子的结合 模板的结合 核苷酸的结合 酶的组装 启动子的识别 σ 核心酶 (core enzyme) 全酶 (holoenzyme) 原核启动子 原核启动子有典型的三部分组成，-35序列、 -10序列和转录起点，均为保守序列。 启动子的关键因素 转录起始位点、-10区、-35区、-10区与-35区之间的间隔。 原核基因转录起始位点通常是嘌呤，其序列为CAT（A为起始位点）。 -10区是一个6碱基保守序列（常以-10为中心）。 -35区是另一个6碱基保守序列（常以-35为中心） 当-10区和-35区中心位置相距16-18bp时，该启动子的功能较强；相距较近或较远时，起始转录的功能都相应减弱。 ……T85T83G81A61C69 Ａ52………T89A89T50A65A100… 启动子选择：RNA聚合酶与启动子可逆性结合形成封闭复合物 开放复合物形成： ?亚基与-10区紧密结合，确认转录起始点，DNA解链形成开放复合物 开放复合物与最初的两个NTP结合并在这两个核甘酸之间形成磷酸二酯键后转变成包括RNA聚合酶、DNA、新生RNA的三元复合物　 转录起始 启动子识别 1.聚合酶对启动子的识别： ?亚基特异性识别并紧密结合DNA启动子序列，确认转录起始点； 只有RNA聚合酶全酶才能起始转录； 转录起始 1.启动子识别 2.转录泡形成 3.转录开始 转录延长 1. ?亚基脱落，RNA–pol聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA模板前移； 2. 在核心酶作用下，NTP不断聚合，RNA链不断延长。 转录延长 DNA的解链和双螺旋化同时进行； 解链区形成RNA-DNA杂交链； RNA聚合酶沿DNA模板链3’-5’方向滑动，RNA的合成是5’-3’方向； 转录泡前后形成的超螺旋由拓扑异构酶解除； 转录延长 5? 3? DNA 原核生物转录过程中的羽毛状现象 核糖体 RNA RNA聚合酶 非依赖Rho (ρ)因子的转录终止 依赖Rho因子的转录终止 转录终止 指RNA聚合酶在DNA模板上停顿下来不再前进，转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来。 分类 两类终止信号有共同的序列特征，在转录终止之前有一段回文结构，之间由几个碱基隔开。 非依赖 Rho因子的转录终止 DNA模板上靠近终止处，有些特殊的碱基序列，转录出RNA后，RNA产物形成特殊的结构来终止转录。 5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU... 3` 5`UUGCAGCCUGAC