葛根芩连汤抗猪传染性胃肠炎病毒要点.ppt

葛根芩连汤抗猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）增殖的初步研究 学生姓名：王蕾 学号：222012602033235 指导老师：宋振辉 选题依据、研究现状 中药制备及细胞活性测定 工作进展及安排 研究意义 研究内容 研究进度 Contents 研究意义 1.在抗生素被广泛应用的今天，病毒性疾病对动物机体健康的危害就上升为所有感染性疾病中最重要的一类。而天然药物具有许多化学药物所不具备的优点，而中药是其中十分重要的组成部分。 2.研究表明，中药复方抗病毒感染临床应用广泛，具有疗效肯定、不良反应少、价格低廉等特点。 3.近年来也有一些关于葛根芩连汤抗病毒的研究，并且也得到证实葛根芩连汤是具有抗病毒的作用的，对许多可引起腹泻性的疾病有治疗作用，但对猪病的研究不多。 4.多年来，猪的传染性胃肠炎（TGE)都对我国的养猪业造成很大的经济损失（猪传染性胃肠炎(TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的猪的一种高度接触性消化道传染病），并且该疾病至今也没有找到很好的方法进行防治，因此进行葛根芩连汤抗猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）增殖的初步研究，以证实葛根芩连汤是否能防治猪传染性胃肠炎。 研究内容（中药制备） 葛根 黄芩 上四味，以水八升，先煮葛根，减两升，内诸药，煮取二升，去滓。 甘草 研究内容（细胞活性测定方法） 一、细胞病变法（CPE） 以CPE（在体外实验中，通过细胞培养和接种杀细胞性病毒，经过一定时间后，可用显微镜观察到细胞变圆，坏死，从瓶壁脱落等现象，称之细胞病变作用）为指标，方法简便，能够对多数药物抑制病毒增殖的效果进行测定与评价。 一般以加号表示细胞病变程度： （1）细胞病变25%为+ （2）细胞病变25%~50%为++ （3）病变细胞50%~75%为+++ （4）细胞病变75%为++++ 研究内容（细胞活性测定方法） 　　二、 噻唑蓝（MTT）染色法 MTT可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成紫色不溶性结晶（颗粒）并沉积在细胞内或细胞周围，而死细胞则无此功能。二甲基亚砜（DMSO）或酸化异丙醇能溶解细胞中的紫色不溶性结晶物，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光密度值（OD），可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成量与细胞数成正比，因此可用于抗病毒药物的活性筛选。 研究内容（细胞活性测定方法） 三、蚀斑减少法 实验证明，将病毒接种于单层培养细胞，数天后固定细胞并染色，因病毒感染而导致变性的细胞不被染色，形成蚀斑（空斑）。蚀斑降低法以此为基础，利用蚀斑的形成，以接种病毒后，在为添加试验药物的培养基上形成的蚀斑数为100%对照，通过计算添加试验药物的培养基上形成的蚀斑减少率，来研究试验药物的抗病毒活性。通常用于对照的蚀斑数为50~100个。超过该范围，药物的感受性即降低，且会影响实验结果。另外蚀斑缩小也是抗病毒活性的指标。因此，蚀斑降低法是一种定量测定法。理论上一个蚀斑代表一个有感染性颗粒。药物处理后，蚀斑数减少，表示病毒复制受到抑制，子代毒粒产生减少。蚀斑降低法定量准确，结果可靠。用一系列药物浓度，可得到剂量反应曲线，适用于不同药物抑制强度的比较。 研究进度 2015年5—6月做试验的前期准备，试验设计，查阅文献； 2015年9—11月完成整个试验； 2015年12月对试验的结果的确定； 2016年1月数据的整理与分析； 2016年2—3月毕业论文的撰写。