高速逆流色谱法原理与应用要点.ppt

高速逆流色谱法 高速逆流色谱（HSCCC） High-speed countercurrent chromatography 建立在一种特殊的流体动力学平衡基础上，利用螺旋管的高速行星式运动产生的不对称离心力场，实现两相溶剂体系的充分保留和有效混合及分配，从而实现物质在两相溶剂中高效分离。 二、基本原理 现代逆流色谱仪器体系： 流体静力学平衡体系 流体动力学平衡体系（HSCCC体系） 仪器的两个特征： a 有一个或多个缠绕有多层聚四氟乙烯管的线轴； b 没有旋转密封接头，有一个安装有两个旋转轴的齿轮传动装置，能产生一个可变的离心力场。 通过公转、自转（同步行星式运动）产生的二维力场，保留两相中的其中一相作为固定相； 离心力场的强度和方向都可以变化； 倾析和混合交替出现，两相液体在螺旋管柱中总是处在接触状态，没有死体积存在； 流体动力学CCC中压力小，固定相保留值大。 高速逆流色谱正是利用了两相的这种单向性分布特征，在高的螺旋管转动速下，如果从尾端送入首端相，它将穿过尾端相而移向首端，同样，如果从首端相送入尾相，它将穿过首端相而移向螺旋管的尾端。 分离时，在螺旋管内首先注入其中的一相(固定相)，然后从合适的一端泵入移动相，让它载着样品在螺旋管中无限次的分配。仪器转速越快，固定相保留越多，分离效果越好，且大大地提高了分离速度，故称高速逆流色谱。 高速逆流色谱与高效液相色谱比较 HPLC和HSCCC的固定相体积不同 ? 理论塔板数的工作范围不同； 到目前为止，逆流色谱的最高分离效率低于5000理论塔板数。 HSCCC中溶质可以进入并接触到液态固定相的整个体积；HPLC中，溶质不能进入到固体支撑体内部，仅涂渍在表面的有机层的液-固界面 ? HPLC有过载现象； HSCCC进样体积可达到柱体积的20%，广泛用于制备性分离。 ? HSCCC与HPLC是互补的分离技术 参数 HSCCC HPLC 固定相 液体 固体 机理 液-液分配（简单） 分配、吸附、离子交换、体积排阻等（复杂） 溶质与固定相作用 与液体固定相的整个体积相接触 在固定相与固体支撑体的界面相互作用 上样量 高 中等 分离效率 低 高 操作 容易 复杂 费用 便宜 昂贵 危险性 高速运转产生机械故障 安全 结构组成 应用领域与拓展 双水相逆流色谱在蛋白质分离纯化中的应用 离心沉淀色谱在蛋白质等分离中的应用 逆流色谱在手性分离中的应用 逆流色谱在天然药物工业中的应用 总结 HSCCC利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱过程中能保留大量固定相。 由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数不同而实现，避免了因不可逆吸附而引起的样品失活、损失、变性等，不仅能使样品全部回收，更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的分离。 具有适用范围广、操作灵活、高效、快速、制备量大、费用低等优点。