步步高·15-16生物(人教版)选修3同步：1.2基因工程的基本操作程序精编.pptxVIP

人教版选修3 专题1 基因工程 课题2 基因工程的基本操作程序 基因工程 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。（既是概念，又是原理） 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程基本操作的四个步骤 有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用 载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。 一、目的基因的获取 (一)、目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的结构基因 请举出三个以上的例子 （二）、获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 请阅读P9第一和二两段 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中直接获取 1.基因文库：概念见P9 2.基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类 种类 基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 3.获取目的基因的根据： 见课本P9 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 4.基因文库的构建方法 基因组文库 某种生物某个时期的mRNA cDNA 受体菌群体 部分基因文库 （cDNA文库） 5.基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③ 条件：_________________________、 ______________ 、 ___________ 、 _______________________ ② 原理：__________ ④ 方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数） ⑤ 结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列（前提） 四种脱氧核苷酸 一对引物 耐热的DNA聚合酶（Taq酶） 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 (二)利用PCR技术扩增目的基因 ⑥ 过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物处延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 (二)利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术扩增与DNA复制的比较 PCR技术 DNA复制 相同点 原理 原料 条件 不同点 解旋方式 场所 酶 结果 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 细胞核内 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 1）反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： （三）人工合成的目的基因 二、基因表达载体的构建——基因工程的核心 目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 2、表达载体的组成 1）启动子 2）终止子 3）目的基因 4）标记基因等 它们各自的作用是什么? 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来。 质粒 DNA分子 限制酶处理 二个切口 两个黏性末端 四个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 3、过程: ①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶