空心菜Vc含量测定（紫外快速测定法）.docVIP

紫外快速测定法 一、原理： Vc的2.6—二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法，是根据Vc具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中Vc的含量。 二、实验器材： 紫外分光光度计、 离心机、 分析天平、 容量瓶（10ml, 25ml）、 移液管（0.5ml，1.0ml）、 吸管、 研钵。 ?三、实验试剂： 10%HCl：取浓盐酸133ml，加水稀释至500ml。 1%HCl：取浓盐酸22ml，加水稀释至100ml。 1M NaOH溶液：称取40gNaOH，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至1000ml。 四、操作步骤： （一）标准曲线的制作 1．抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸10mg，加2ml 10%盐酸，加蒸馏水定容至100ml，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100μg/ml。 2．取带塞刻度试管8支并编号，分别按表内所规定的量加入抗坏血酸标准溶液和蒸馏水。 ? 1 2 3 4 5 6 7 8 标准抗坏血酸溶液加入体积（ml） 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1.0 蒸馏水加入体积（ml） 9.9 9.8 9.7 9.6 9.5 9.4 9.2 9.0 总体积（ml） 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 抗坏血酸溶液浓度（μg/ml） 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0 3．消光值的测定：以蒸馏水为空的，在243nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（μg）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。 （二）样品的测定 1．样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00g于研体中，加入2-5ml 1% HCl，匀浆，转移到25ml容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（1 0000g, 10min）来消除。 2．样品的测定：取0.2ml提取液，放入盛有0.4ml 10% HCl的10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其消光值。 3．待测碱处理液的制备：分别吸取0.2ml提取液，2ml蒸馏水和0.8ml 1M NaOH溶液依次放入10ml容量瓶中，混匀，15min后加入0.8ml 10% HCl，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243nm处测定其OD值。 4．由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中Vc的含量。 5．也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过查标准曲线，计算出样品的Vc的含量。 四、计算 Vc的含量（μg /g） μ×V总 / V1×W总 式中： μ——从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量（μg） V1——测消光值时吸取样品溶液的体积（ml） V总——样品定容体积（ml） W总——称样重量（g）