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第六章 植物胚胎培养及离体授粉 6.1 植物的胚胎培养 6.2 胚珠和子房培养 6.3 离体授粉 6.4 胚乳培养 第一节 植物胚培养 一、胚培养的类型： 分为成熟胚培养和幼胚培养两种。 1、成熟胚培养 成熟胚为子叶期以后的胚，其在简单的培养基上即可萌发生长。对营养条件要求不严格。 主要用来繁殖不易萌发植物，或研究胚和胚乳及子叶的关系等。 成熟胚培养过程---以玉米成熟胚培养为例 1）玉米种子消毒 2）在黑暗条件下，将种子放在无菌湿润的含滤纸的培养皿中培育6h。 3）将吸涨的种子在无菌培养皿内将胚分离出来 4）无菌水冲洗3次 5）在MS培养基中暗培养。 6）观察：2d出现胚根，3-4 d出现胚芽，10d长成幼苗。 2、幼胚培养 对发育早期的胚进行培养。培养技术和条件要求较高。 2、幼胚的分离及培养 分离：先取出胚珠，剥离珠被，取出完整的幼胚，后培养。 培养：胚离体培养发育时期分为异养期和自养期。在心形期转入自养生长。对于难培养的幼胚，可利用胚乳看护培养。 培养基与培养条件 1、培养基 2、培养条件： 1）糖类： 2）附加成分 3）光照 4）培养方式： 幼胚培养适于液体培养， 成熟胚适于固体培养 胚发育早期要求较高的的渗透压，而随着胚的发育逐渐降低。 5 其他 维生素：不同的植物对维生素的要求有差异。 氨基酸：在培养基中加入氨基酸，可以明显改善幼胚的生长状况。 （四）胚胎的发育时期 一般胚龄越小越难培养，因此必须选择适当发育时期的胚胎进行培养才能成功。 一般心形期以后的双子叶胚比较容易培养，而球形期以前的胚很难培养。 2、打破种子休眠，缩短育种周期 3、提高种子萌发率 特别是对于一些长期营养繁殖的植物种子。 三倍体后代的特征 被子植物的胚乳是三倍体，通过胚乳培养可得到三倍体植株，产生无子果实。 粗壮，叶片大而肥厚，花大，果实大，但结实率低 单倍体后代特征 形成纯合子，植物品种性状稳定 植物隐性性状出现 发育:诱导形成愈伤组织----再分化形成胚状体或不定芽---生根培养----植株 Endosperm 胚乳 Pericarp 种皮 Aleurone layer 糊粉层 Embryo 胚 胚乳外植体制备:种子消毒---取出胚乳 一般培养取材的最佳时期选择处于生长旺盛阶段的胚乳； 对于有较大胚乳组织的种子，可将种子直接进行表面消毒，在无菌条件下除去种皮； 对于胚乳被一些黏性物质层包裹的种子，需要去掉黏性物质。 对于有果实的种子，可将整个果实进行表面消毒，在无菌条件下切开幼果，取出种子，然后分离出胚乳组织进行培养 大多数植物的胚乳培养，无论是成熟或未成熟的，都需要首先经历愈伤组织阶段，才能分化出植株。 常用培养基:MS使用较多 植物生长物质和有机添加物 糖类的选择：多选用蔗糖，浓度一般为3～5﹪ 培养条件： 温度：25℃左右 光照： PH值:4.6～6.3之间 胚乳培养的应用： 获得三倍体植株，用于育种利用。三倍体植株具有营养体大，无籽等特点。如无籽西瓜。 胚乳培养也会产生较多的混倍体，影响育种利用。但可用于染色体工程研究。 一、胚珠培养: 概念：在人工控制的条件下，对胚珠进行离体培养使其生长发育形成幼苗的技术。 1942首次在兰花中尝试成功，缩短了从授粉到种子成熟的时间。1980年成功培养了未授粉的非洲菊、烟草的胚珠，获得了单倍体植株。 子房培养的分类 根据培养的子房是否授粉可分为授粉子房培养和未授粉子房培养。 1949年和1951年最早在黄瓜、番茄、菜豆、草莓、烟草等植物上获得成功。 授粉子房培养形成成熟果实和种子； 未授粉子房培养形成小的无籽果实。 子房培养的培养过程 1、制备外植体：在开花前后适宜时期取子房或幼花，消毒 2、子房培养：固体或液体培养均可 1.培养基 子房培养所需的基本培养基比较简单 可采用N6,MS,White,Nitsch等的有机盐，再加入适当的有机成分和植物生长物质。 也可加入一些天然提取物。 蔗糖浓度也因不同植物材料而异，多在3～10﹪之间。 2.材料的选择和培养 材料的选择： 受精子房的取材一般是在授粉后摘取花蕾。 未受精子房一般需要在开花前1～5天摘取花蕾。 3.子房培养物的倍性 受精子房 ：产生胚状体和愈伤组织，进而分化成二倍体植株。如果其胚乳也能形成植株，可以得到三倍体植株。 未受精子房：可得到单倍体植株。 总之，子房培养可以得到不同倍性的植株。 影响离体子房和胚珠产生单倍体的主要因素 供体植物的基因型和子房的发育阶段 培养基成分 培养条件 一、概念: 指将