一蛋白质化学.pptVIP

丙氨酸的电离平衡  丙氨酸的等电点 p I =（2.34 + 9.69 ) / 2 = 6.02 例:大黄中游离蒽醌的纸色谱图 影响α-螺旋形成的因素： aa组成和序列，多聚aa R基小，不带电荷的多聚丙氨酸，在pH7的水溶液能自发地卷曲成α-螺旋。但是多聚Lys在同样pH条件下却不能形成α-螺旋，而是以无规卷曲形式存在。这是因为多聚Lys在pH7时R基具有正电荷，彼此间由于静电排斥，不能形成链内氢键。在pH12时，多聚赖Lys即自发地形成α-螺旋。同样，多聚Glu也与此类似。 多聚Pro的α-C原子参与R基吡咯的形成，环内的Cα-N键和C-N肽键都不能旋转，而且多聚Pro的肽键不具有酰胺H，不能形成链内氢键，因此，多肽链只要存在脯氨酸（或羟脯氨酸）， α-螺旋即被中断，并产生一个“结节”。 除R基的电荷性质外，R基的大小对多肽链能否形成螺旋也有影响。多聚Ile由于它的α-C原子附近有较大的R基，造成空间阻碍，因而不能形成α-螺旋。 （2）β-折叠结构（β-pleated sheet） Cα Cα Cα Cα Cα Cα R R R R R R N N C N N C C C 平行 反平行 β-折叠片中，相邻多肽链平行或反平行（较稳定）。 纤维状蛋白：反平行；不同肽链形成氢键 球蛋白：平行、反平行同样广泛，也可在同意肽链不同肽段之间形成 β-角蛋白 丝心蛋白 （3）β-转角（β-turn） N—1CH—C C 2CH N—H O=C 3CH N C—4CH—N R R H O H R R O H O β-转角经常出现在连接反平行β-折叠片的端头。 非重复性结构 （4）无规卷曲（自由回转） 没有一定规律的松散肽链结构。酶的活性部位。 2. 超二级结构和结构域 超二级结构是指若干相邻的二级结构中的构象单元彼此相互作用，形成有规则的，在空间上能辨认的二级结构组合体。是蛋白质二级结构至三级结构层次的一种过渡态构象层次。 αα、ββ、βαβ、βββ Rossmann折叠 ββ βαβαβ 结构域是球状蛋白质的折叠单位。多肽链在超二级结构的基础上进一步绕曲折叠成紧密的近似球行的结构，具有部分生物功能。对于较大的蛋白质分子或亚基，多肽链往往由两个以上结构域缔合而成三级结构。 3. 蛋白质的三级结构 ——指多肽链上的所有原子（包括主链和残基侧链）在三维空间的分布。 肌红蛋白 亚基（单体）：四级结构的蛋白质中每个球状蛋白质 二聚体蛋白：两个亚基组成 四聚体蛋白 寡聚蛋白质：由两个或两个以上亚基组成的蛋白质 单体蛋白质：仅由一个亚基组成并因此无四级结构的Pr 同多聚 杂多聚 原体 4. 蛋白质的四级结构 ——多肽亚基（subunit）的空间排布和相互作用。亚基间以非共价键连接。 血红蛋白 Hemoglobin (Hb) c. 叠氮反应 酰化氨基酸甲酯 Y=酰基 酰化氨基酸酰肼 酰化氨基酸叠氮 (3) α-氨基和α-羧基共同参加的反应 a.与茚三酮的反应： 加热 还原型茚三酮 水合茚三酮 蓝紫色物质 Pro产生黄色物质，其它为蓝紫色。在570nm（蓝紫色）或440nm（黄色）定量测定（几μg）。 黄 色 b.成肽反应 一个aa的NH2与另一个aa羧基可以缩合成肽 二酮吡嗪 （甘氨酸酐） Gly O c. 与甲醛的反应：氨基酸的甲醛滴定法 R—CH—COO- NH3+ R—CH—COO- NH2 + H+ OH- 中和滴定 HCHO R—CH—COO- NHCH2OH HCHO R—CH—COO- N(CH2OH)2 氨基酸能直接用酸、碱滴定来进行定量测定吗？？ H2N—CH CH2 S SH NO2 HOOC S NO2 COOH COOH + S S NO2 NO2 HOOC COOH H2N—CH—COOH + CH2 SH pH8.0 硫代硝基苯甲酸 测定Cys含量（pH8.0λ412nm的摩尔消光系数ε=13600） (4) 侧链R基参加的反应 5，5’-双硫基－双（2-硝基苯甲酸） Ellman 试剂 4、aa混合物的分析分离 （1）分配层析法的一般原理 常用分离方法：分配柱层析、纸层析、薄层层析、离子交换层析、气液层析、高效液相层析 所有的层析系统通常都由2相组成，一个为固定相或静相，一个为流动相或动相，混合物在层析系统中的分离决定于该混合物的组分在这两相中的分配情况。 纸色谱为分配色谱，色谱过程在固定相构成的平面状层下进行。滤纸为载体，固定相为滤纸上的水，流动相（展开剂）为用水饱和过的有机溶剂。纸色谱属于分配色谱。 衡量物质向上移动的物理量是比移值（Rf）（相对迁移率） =