医学微生物学与免疫学实验指导研讨.docVIP

医学微生物学与免疫学实验 实验目的和要求 一、实验前务必做好预习，明确实验目的、内容及理论依据等，避免或减少错误的发生，以保证实验在预期内完成。 二、实验操作严格按要求进行，严防污染和感染。 三、对示教实验联系理论认真观察。对光镜下标本不得擅自挪动视野，其他示教标本看后必放回原处。对录像教学应作重点、简要的笔记。 四、客观真实地记录实验结果并进行分析，若与理论不符，要加以分析讨论，找出原因，必要时重复实验。 五、在规定时间内完成实验报告，报告要求字迹清楚，说明问题简单扼要。 实验室规则 1. 非实验必需品禁止带入实验室。 2. 穿白大衣，按规定就坐。 3. 实验室应保持安静和良好的秩序，不得高声谈笑、乱动物品或随便走动。 4. 实验室内严禁吸烟、进食、饮水或用嘴湿润铅笔和标签等，也不要用手搔抓抚摸机体。 5. 实验时若不慎发生皮肤创伤，或病原菌污染衣物、卓（地）面等事故，应立即报告指导老师，进行紧急处理。 6. 实验所用的玻片、试管、吸管等，用后应随即投放盛有消毒剂的指定容器内，不得放在桌上，也不可在水池中冲洗。 7. 每次实验完毕，按实验要求应及时清理实验物品，清扫卫生；离开实验室时，消毒洗手后离开实验室；对白大衣经常清洗消毒。 油镜的使用和维护 目的：掌握油镜的使用与维护，熟悉油镜的使用原理。 材料：显微镜，拭镜纸，液体石蜡油，二甲苯 原理：油镜的透镜极小，工作焦距最短，光线通过玻璃和空气，由于介质密度不同发生折射，射入镜筒的光线极少，视野暗，物象不清晰。如在玻片与镜头（透镜）之间加上折光率和玻片（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515）就可减少光线的折射，加强视野的亮度，获得清晰的物象。 步骤：显微镜油镜的使用和维护 1.将显微镜平稳地安放在实验台适宜处。识别油镜头：标有100×、OIL、HI等字样。 2. 打开电源，用低倍镜对光，打开光圈，调节聚光镜的位置，使视野光线充足。 3. 标本上加镜油一滴，转动粗螺旋，使油镜头缓缓下降，用眼从侧面观察，直到油镜头浸入油中接近玻片为止。 4. 从目镜观察，同时徐徐转动粗螺旋提升，见模糊物象后再用细螺旋调节，直到见到清晰物象为止。 5. 观察完毕，粗螺旋提高镜头，取下标本片，油镜头使用后立即用擦镜纸擦净镜头上的油。如油已干，可在擦镜纸上滴少许二甲苯擦拭，并立即用另一擦镜纸擦去二甲苯，因二甲苯能溶解镜头上的固定胶以致使镜头脱落。 6.将镜头转呈“八”字，调低聚光器，对号送入柜子内存放。 革兰染色 目的：掌握革兰染色的原理及操作。 材料：干净玻片，接种环，葡萄球菌和大肠杆菌18-24h培养后的混合菌液，酒精灯，一套革兰染液 原理：主要为细胞壁结构的差异。G+三维肽聚糖结构的交联度大，通透性低，脂质少或无，酒精作用使孔径缩小；而G-肽聚糖为二维疏松结构，薄，外膜含大量脂质，易被酒精溶解，使细胞壁通透性增高，结晶紫-碘复合物被酒精溶解而脱色。 步骤： 1. 细菌标本的制作 （1）涂片：无菌操作。取一接种环混合细菌悬液，涂布成直径约1cm的涂片，涂片应薄而均匀。 （2）干燥：涂片最好在室温中自然干燥。必要时可将标本面向上，放在酒精灯上方微火处干燥。 （3）固定：标本面向上，在酒精灯火焰外焰按钟摆的速度来回通过3次，放置待冷后染色。固定的目的是杀死细菌，使细菌与玻片黏附较牢固。菌体蛋白质变性后，提高与染料的亲和力。 2. 革兰染色 （1）初染：滴加结晶紫染液1-2滴于涂片上，1min钟后用自来水缓缓冲洗。 （2）媒染：滴加碘液1-2滴，1min后用自来水缓缓冲洗。 （3）脱色：加95%酒精数滴，摆动玻片使酒精与细菌充分接触，约20-30s后，立即用自来水缓缓冲洗。 （4）复染：滴加稀释碳酸品红液，30-60s后，自来水缓缓冲洗。 用吸水纸吸干后，用油镜观察。镜检后，载片放入消毒缸。 细菌特殊结构的观察 目的：观察并掌握细菌的形态及特殊结构。 材料：细菌鞭毛、芽孢、荚膜的标本片；革兰阳性菌、革兰阴性菌染色标本片 示教： 革兰阳性菌：葡萄球菌，紫色 革兰阴性菌：大肠杆菌，红色 细菌鞭毛 细菌芽孢 细菌荚膜 细菌的分布 目的：了解细菌在自然界中的分布情况。 材料： 普通琼脂平板培养基、血平板、镊子、无菌棉拭子、革兰染液。 操作步骤： 1.空气中细菌的检查 （1）采用沉降法：取普通琼脂平板培养基1只，任意置一处，启盖约15分钟，再盖上，37℃培养24小时，观察有无细菌生长