血凝与血凝抑制实验教程方案.pptVIP

血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验 一、实验目的 二、实验内容 三、实验原理 四、实验材料 五、实验方法与结果判定 六、注意事项 七、新城疫背景介绍 一、实验目的 1、掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操 作方法和结果判定方法 2、了解新城疫有关背景知识 二、实验内容 1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原 2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理 1、血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。 2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。 四、实验材料 1、血凝板（2人/块） 2、新城疫阳性血清 3、被检血清（1份） 4、1％红细胞悬液 5、稀释液 6、移液器（50ul, 2人/把） 7、枪头 五、实验方法与结果判定 血凝试验（HA) 1、在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水 2、在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul 3、每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul 4、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 5、结果判定 结果判定标准 1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、 ＋＋ ：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集； 4、 ＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集； 血凝价的判定 以出现＋＋（50％凝集）的抗原最高稀释倍数为该抗原的血凝价（1:128）。 50ul 1:256稀释的病毒抗原为该抗原的一个血凝单位。 血凝抑制试验 1、将病毒抗原稀释成4个血凝单位（1/128×4=1:32） 2、在血凝板上1－12孔内各加入50ul生理盐水； 3、在第1孔内加入被检血清50ul，然后倍比稀释至第11孔，最后弃50ul； 4、第1－12孔内加入4单位抗原50ul（第12孔为病毒对照）； 5、每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul； 6、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 6、结果判定 结果判定标准 1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、 ＋＋：红细胞形成一个环状，四周有下凝集块，即50％凝集； 4、 ＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。 血凝抑制价的判定 以出现完全抑制凝集(即不凝集) 的血清最高稀释倍数为该血清的血凝抑制价（1:4）。 六、注意事项 1、红细胞用前请摇匀 2、用枪加样定要准，尽量不要有气泡 3、结果判定有耐心 4、HA和HI勿相混 七、新城疫背景介绍 鸡新城疫（Newcastle Disease ND ） 1、概 述 ND是由ND病毒（Newcastle disease Virus, NDV）引起的高度接触性和高度毁灭性的急性败血性传染病。 1926年首先发生于印尼，同年发现于英国新城 我国1928年有该病记载 是当今全球范围内最严重的家禽传染病之一 被国际兽疫局（OIE) 列为A类传染病 别名： 新城疫、亚洲鸡温、伪鸡瘟 鸡瘟 ： 禽流感、欧洲鸡温、真性鸡温 新城疫病毒，属副粘病毒科，副粘病毒属。 病毒颗粒表面具有血凝素蛋白，可以刺激机体产生血凝抑制抗体， 根据临诊表现和病程长短分为： （1）最急性型： 突然发病，病变不明显，见于雏鸡及本病流行初期。 急性型：（典型新城疫） 亚急性型（非典型ND) 慢性型（非典型ND） （2）、急性型：侵害消化系统为主，也称嗜内脏速发型。 病状特点： a. 食欲减退，饮水增加，离群呆立，眼睛半开半闭，翅膀下垂，冠、肉髯呈紫黑色。 b. 嗉囊积液 、体温升高、呼吸困难。鼻腔内有大量分泌物，严重拉稀 粪便呈黄绿色或褐色，有时混有血。 c.死亡率高, 非免疫鸡感染后可以80-100%死亡。 d.部分患鸡出现神经症状，头颈歪向一侧而咀向上，母鸡产蛋下降。 病变特点： 全身的粘膜和浆膜出血，突出病变在消化道。 A.腺胃粘膜水肿，粘膜上的乳头及其周围有出血点，间有溃疡。 B.腺胃与肌胃、腺胃与食道交界处粘膜可见到出血点或出血带