选修一微生物的实验室培养课件.ppt

选择培养基 鉴别培养基 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 101 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 ⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： 菌液 ⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： b.涂布平板： 不超过0.1ml 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 滴 灼 试 涂 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 ⑴平板划线法： 二.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌： 1.接种： ⑵稀释涂布平板法： 2.培养： 将接种后的培养基和一个未接种的培养基 放入37℃恒温箱中培养12h～24h后， 观察并记录 专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养 培养基可以分为哪几类？ 培养基一般都含有哪些营养物质，此外 还要满足哪些要求？ 获得纯净培养物的关键是什么？ 什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？ 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤？ 学习目标 如何倒平板？ 微生物的类群 原生生物： 原核生物: 真菌: 病毒: 如酵母菌 如草履虫、单细胞藻类等 无细胞结构 真核细胞 细菌、蓝藻 原核细胞 ？ 一、培养基 1. 概念：人们按照微生物对_________的不同需求，配置出供其____________的营养基质。 营养物质 生长繁殖 2.培养基的类型和用途 按物理性质 固体培养基:加琼脂；用于分离、鉴定、计数 液体培养基：不加凝固剂；用于工业生产。 半固体培养基：加少量琼脂；可用于保藏菌种。 按化学成分 合成培养基：成分明确；分类鉴定。 天然培养基：成分不明确；用于工业生产。 按目的用途分 鉴别培养基：培养基中加入某种试剂或化学药品，区别出不同类型的微生物。 选择培养基：根据某一种或一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性设计培养基。如用青霉素选出酵母菌等。 分离导入了目的基因的受体细胞 加入青霉素等抗生素 分离固氮菌 不加氮源 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入青霉素 分离自养型微生物 不加含碳有机物的无碳培养基 分离金黄色葡萄球菌 加入高浓度食盐 应用 选择培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其它种类微生物生长的培养基。 根据微生物的代谢特点在培养基加入某种指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同的微生物 只起鉴别作用，并不能抑制其他微生物 固体培养基 液体培养基 培养基一般都含有哪些营养物质，此外 还要满足哪些要求？ 不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质 另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 一.培养基： 微生物生存的环境和营养物质 1.基本成分： 碳源、氮源、水、无机盐 ⑴碳源 无机碳源： 有机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 牛肉膏、蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 ⑵氮源 无机氮源： 有机氮源： NH4＋、NO3- 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等 注：对于异养微生物，含C、N的化合物既为碳源，也是氮源。 牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 培养基配制原则 ⑴目的明确： ⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当 ⑶适宜的pH值： 有机碳源 异养型： 根据微生物的种类、培养目的选择原料 自养型： 不加碳源 加入缓冲剂 （CO2碳源） 生产 科研 2.无菌范围： 实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 酒精灯旁操作 超净工作台 二、无菌操作技术 1. 获得纯净培养物的关键？ 防止外来杂菌入侵 2、无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 避免操作者自身被微生物感染 消毒与灭菌 消毒：使用较温和的物理或化学方法仅杀死物 体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不 包括芽孢和孢子）。 灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内所有的 微生物，包括芽孢和孢子。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对恶劣的环境有很强的抵抗力。每一细胞仅形成一个芽孢，所以其没有繁殖功能。 细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作用的生