l600高效液相色谱仪的使用方法.pptVIP

* L600高效液相色谱仪的使用方法  L600 high performance liquid chromatograph 孙逸来 第一节 高效液相色谱的工作原理 一、高效液相色谱的原理 二、高效液相色谱的特点 三、高效液相色谱的优点和缺点 一、工作原理 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 二、特点 1.分离效率高：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。 2.分析速度快：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。 3.应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势 。 4.操作自动化 三、高效液相色谱的优点和缺点 1．优点 高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备了高压输液设备，流速较快。 2. 缺点 目前高效液相色谱法已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。但是高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要缺点。 第二节 L600高效液相色谱仪的结构组成和基本技术参数 流动相 高压输液泵 紫外检测器 柱温箱 进样器 一、L600高效液相色谱流程图 溶剂 色谱泵 进样器 HPLC色谱柱 检测器 废液 数据处理系统 二、基本技术参数 图2-1 高压输液泵参数 图2-2 紫外检测器的参数 图2-3 进样器参数 第三节 L600高效液相色谱仪的应用范围 针对L600高效液相色谱仪有几个领域的应用范围。 1.环境分析中的应用： 可应用于环芳烃、农药残留分析等。 2.食品分析中的应用： 可应用于食品营养成分分析、食品添加剂分析、食品污染物分析等。 3.生命科学中的应用： 可在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学及生化领域的分子量物质纯化、分离和测定等。 4.医学检验中的应用： 体液中代谢物测定、药代动力学研究、临床药物监测等的分析测定。 液一液分配色谱法（LLPC） 在液-液色谱中,流动相和固定相都是液体,它能适用于各种样品类型的分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非离子型的化合物。 分离原理 液液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同，都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。所不同的是液液色谱的分配是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能分离各种复杂组分 第四节 L600高效液相色谱仪的使用流程 输液系统 进样系统 检测系统 数据记录处理系统 开启HPLC系统各个设备的电源 打开泵、自动进样器、检测器电源，待设备通过自检，打开计算机启动色谱管理软件 准备流动相 过滤，脱气 色谱泵排气 用新配制的流动相灌注泵 * 过滤与脱气 过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。 脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动 * * * * * * * * 、 * * 第五节 L600高效液相色谱仪的维护 维护流程图 吸滤头 单向阀 柱塞密封圈 线路过滤器 进样器 检测器 材料：不锈钢烧结，孔径10um 故障：堵塞 表现：管路中不断有气泡生成 措施：用5％稀硝酸，超声波清洗， 再用蒸馏水清洗 材