转基因动物概况汇总.ppt

第九章 我国转基因动物研究概况 第一节 猪的基因工程育种 一、立项背景和研究目标 1、我国是传统的养猪大国，是世界上养猪最多的国家。 就全国而言,生猪存栏和出栏基本保持平稳发展, 存栏和出栏呈现同步发展的趋势。2008年3月存栏4.1亿头，6月达到4.7亿头。能繁母猪比重超过12%。 2、由于国土面积辽阔，各地自然条件差别很大，加上农业生产的产业化程度较低，猪的品种主要是历史上形成的各种地方品种及其杂交种。这些品种的优点是耐粗饲和肉的风味好，缺点是瘦肉率低，生产单位体重需要的饲料较多。 不同品种猪-毛色 猪的耳型描述 耳型 耳型 体型 体型 四肢 几个概念 活体重 胴体重 瘦肉率 眼肌 肉质性能 猪的宰前活重（kg) 宰前12小时停食称重 屠宰日龄按当地习惯并注明 胴体重 胴体重：去除头、 蹄、尾、内脏、 包括板油、肾的 左右两半胴体 总重。 瘦肉率 用手工剥离半胴体,分成瘦肉、脂肪、皮、骨四部分，分别称重，再相加，作为100%；（不计算分割过程中的损耗，不包括板油、肾 ）。分别计算瘦肉、脂肪、皮、骨所占的比例。 眼肌面积测量 眼肌面积测量2 用硫酸纸描绘眼肌面积（2次），用求积仪或方格计算纸求出眼肌面积（cm2） 或用下列公式：眼肌面积（cm2）=眼肌高度（cm）×眼肌宽度（cm）×0.7 肉质性能 水份、 蛋白质、 肌内脂肪、 大理石纹 其它指标 3、猪是单胃动物，饲料的主要成份是粮食和块根、块茎。所以，猪的饲料和人的口粮是竞争性关系，不是互补的关系。养猪太多和猪的饲料转化效率太低，将会给种植业带来很大负担。 养猪主产区主要分布在粮食主产区应为比较合理的布局 当前我国生猪生产主要集中在四川盆地、黄淮流域玉米、小麦主产区、东北玉米主产区和长江中下游水稻主产区等四大地区。 从畜牧经济学角度出发，养猪业为耗粮型畜牧业，需要消耗大量的玉米等粮食作物，为降低成本，将粮食就地转化为畜产品，以提高农作物附加值，养猪主产区主要分布在粮食主产区应为比较合理的布局。 4、在制订“863”计划生物技术领域“七五”计划时，很自然的把利用转基因技术生产生长速度快、饲料报酬高的基因工程猪作为动物生物技术的首要课题。 5、课题的目标是通过10-15年的研究，利用在猪体内表达外源性猪的生长激素基因，生产出增重速度提高20％，饲料消耗节约15％，并能保持我国猪肉特有品质的基因工程猪品种。 二、目的基因的分离和表达载体的构建 在我国设立转基因猪的研究课题之前，已有美国、英国和澳大利亚等三个国家设立了同样的课题。美国利用现成的人生长激素基因作为目的基因，英国利用牛的生长激素基因，澳大利亚则构建了含有猪生长激素基因cDNA片段和染色体组基因片段的混合结构（mini-gene）。 此外一些与猪生产性能有关的基因 猪应激敏感基因(RYR1), Ch6, PSE肉, 应激 雌激素受体基因(ESR), Ch1, 产仔数 促卵泡素β亚基基因(FSHβ), Ch2，产仔数 RN基因, Ch15, 酸肉, Napole产量 黑素皮质激素受体4(MC4R)基因, Ch1, ADG,BF,FI 心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因, Ch6, IMF 脂肪细胞脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因, Ch4, IMF 猪肌肉生长抑制素(MYOG), Ch9, 瘦肉率 兰尼定受体(RYR1)/氟烷基因(Hal) 雌激素受体基因(ESR) 目的基因的分离和表达载体的构建 以猪生长激素为例 克隆的猪生长激素基因全长约5.0kb，由4个外显子和3个内含子以及5ˊ端和3ˊ端调控序列组成。 为了能够人为地控制外源性猪生长激素基因的表达，采取了基因融合表达的战略，用羊的重金属螯合蛋白 MT－1基因启动子来驱动猪的生长激素结构基因表达. 1、分离了2.5kb的一个猪生长激素基因片段，除去了它的5ˊ端和3ˊ端调控序列，只保留它的4个外显子和3个内含子。 2、将这个2.5kb的猪生长激素基因融合到长度为1.1kb羊MT－1基因启动子的下游,构建成oMT／pGH融合基因，是目的基因的基本表达结构。 3、为了基因的整合效率，还在融合基因的下游3’增加了一段猪的微卫星DNA序列； 4、而在它的5ˊ端，又装上鸡溶菌酶基因的MAR序列，目的是为了克服或者更准确地说是减少基因表达时受邻近基因的干扰，便于从体外调控基因的表达。 我国是首先使用猪的染色体组基因生产转基因猪的，实践证明，这种结构是有很多优点的。 第一、是没有异种蛋白质表达，生产出的猪仍然是纯天然的； 第二、基因表达适度和可控性强，表现在生产出生长速度比对照快70％的转基因猪，而健康状况同正常猪没有差别； 第三