第一章绪论111.docVIP

绪论 1 环境微生物学 1.1环境微生物学及研究发展历程 自18世纪第一次工业革命以来,人类的生产能力得到了巨大的发展,利用和改造环境的能力大大提高,但同时也带来了严重的环境问题。工业生产过程中排放的废水、废气、废渣,造成了严重的环境污染。从20世纪30年代的比利时马斯河谷事件开始,公害事件相继发生,如美国洛杉矶的光化学烟雾事件、伦敦烟雾事件、日本四日市的哮喘病事件、日本的水误病事件和骨痛病事件、印度的帕博尔农药泄漏事件、前苏联切尔诺贝利核电站泄漏事件等,均对人类造成了极大的危害。随着工农业生产的迅速发展和人类生活水平的不断提高,以及都市化和交通运输的发展,越来越多的污染物被产生,大量人工合成的污染物排放到环境中,使大气、水体、土壤乃至地下水都受到不同程度的污染。因此,有许多科学家致力于研究污染物在生态系统的迁移、转化与归宿,特别是微生物对各种污染物进行降解与转化的途径。早在20世纪20年代,就开始利用活性污泥对污水进行处理。从60年代开始,环境微生物学逐渐从其母体学科一微生物学中脱颖而出,发展成为一个独立的学科。 环境微生物在环境保护和环境污染治理中起着非常重要的作用。很多微生物具有降解和转化污染物的能力,而且微生物具有容易发生变异的特点,它们比其他生物更容易适应环境。微生物的种类多,代谢类型多样,容易发生变异,又可产生各种诱导酶,从而能降解或转化那些环境中已经存在的污染物,也可降解或转化那些环境中“陌生的”化学物质。总之,环境微生物在环境污染物的治理和污染环境的恢复中起着举足轻重的作用。 1.2分子生态学技术在环境微生物研究中的应用现状 分子生物学是以从分子水平研究生命本质为目的的一门新兴边缘学科,它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象,是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会,也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。 现代分子生物学理论的发展推动了分子生物学实验技术的迅速发展,这些技术的推广应用为微生物学及其他生物学的研究提供了新的手段,使很多学科与分子生物学相结合形成了新的交叉学科,分子生态学就是在这样的背景下诞生了。 1992年,Burke等,在《Molecular Ecology》发刊词中首次提出了分子生态学的概念,提出分子生态学技术包括探针、序列和引物,并指出分子生态学是应用分子生物学的技术方法为生态学和种群生物学的各个领域提供革新见解的学科,从而确立了分子生物学技术在分子生态学研究中的首要地位,也促进了分子生物学技术在微生物学研究中的应用。 1.3课题研究背景及主要研究内容 2 分子生态学技术 2.1 核酸探针检测技术 以核酸分子杂交技术为核心,利用探针分析DNA序列及片段长度多态性.探针是能与特定核苷酸序列发生特异性互补的已知核酸片段,它可以是长探针 100～1000bp ,也可以是短核苷酸片段 10～50bp ,可以是从RNA制备rDNA探针,也可以是PCR产物或人工合成的寡核苷酸探针.根据碱基互补配对的原则,被标记 放射性或非放射性的 的核苷酸探针以原位杂交、Southern印迹杂交、斑点印迹和狭线印迹杂交等不同的方法,可直接用来探测溶液中、细胞组织内或固定在膜上的同源核酸序列.由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的高度灵敏性,使得核酸分子杂交技术广泛应用于对环境中的生物的检测,定性、定量分析它们的存在、分布、丰度和适应性等研究目标[9].Guo等[7]应用核酸杂交方法定量分析了被燃油污染及不污染的两种土壤样品中各种烃降解基因的检出率,结果表明污染越严重,烃降解基因的含量也越高,从而可通过这种灵敏、简捷的方法间接地评价土壤中燃油污染的程度. 2.2 利用引物的PCR技术 在分子生态学中,根据扩增的模板、引物序列来源及反应条件的不同可将PCR技术分为以下几种:1 反转录PCR技术 RT-PCR ,是在mRNA反转录之后进行的PCR扩增,可以用来分析不同生长时期的mRNA表达状况的相关性.2 竞争PCR C-PCR [10],是一种定量PCR,通过向PCR反应体系中加入人工构建的带有突变的竞争模板、控制竞争模板的浓度来确定目的模板的浓度,对目的模板作定量研究。竞争性PCR曾被用来测定受多环芳香烃污染的沉降物中的 编码邻苯二酚-2,3-加双氧酶的dmpB基因的浓度。3 扩增的rDNA限制酶切分析技术 ARDRA ,是美国最新发展起来的一项现代生物鉴定技术,它依据原核生物rDNA序列的保守性,将扩增的rDNA片段进行酶切,然后通过酶切图谱来分析菌间的多样性.4 随机扩增多态性DNA技术 RAPD [6],是以一个通常为10碱基的寡核苷酸序列为引物,对基因组DNA随机扩增来鉴别多态性D