生物化学-蛋白质探索.ppt

带正电荷多蛋白紧密结合 带负电荷多蛋白流过层析柱 阳离子交换树脂工作示意图 Cation- exchange column 练习 含有Lys、Ile和Glu的混合物通过阳离子交换法分离，使用pH3.5的阳离子交换柱，缓冲溶液也是pH3.5，哪一种氨基酸会先从住上洗脱？是否还需要其他的步骤洗脱氨基酸？ 谷氨酸先被洗脱，因为 pH值最接近pI。 Ile和Lys会带正电 与柱结合，洗脱Ile需要将pH提高至6左右；洗脱Lys须将pH升高至11。 2.电泳 蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术, 称为电泳(elctrophoresis) 。 根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。 在一定的电场和介质中，蛋白质迁移速度与蛋白质分子量、所带电荷及分子形状有关。 几种重要的蛋白质电泳 *SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。 *等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。 *双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。 PAGE 电泳结果 聚丙烯酰胺凝胶电泳 丙烯酰胺和交联试剂（甲叉双丙烯酰胺）在过硫酸铵催化下聚合而成。 可以控制孔径大小 d. 等电聚焦电泳（IFE） 蛋白质在具有pH梯度的介质中进行分离。在电场中，每种蛋白质成分将移向并停留在等于其等电点的pH处