分子生物学-2教程方案.ppt

* * * * * * * 标准：选择标志 强启动子 翻译调控序列 多接头克隆位点 E.coli表达体系的不足： 不宜表达真核基因组DNA； 不能加工表达的真核蛋白质； 表达的蛋白质常形成不溶性包涵体(inclusion body) ； 很难表达大量可溶性蛋白。 1. 原核表达体系 (E.coli表达体系最为常用) 优点：可表达克隆的cDNA及真核基因组DNA 可适当修饰表达的蛋白质 表达产物分区域积累 缺点：操作技术难、费时、经济 转染 —— 将表达载体导入真核细胞的过程 方法：磷酸钙转染 DEAE葡聚糖介导转染 电穿孔 脂质体转染 显微注射 2.真核表达体系（酵母、昆虫、乳类动物细胞） 第三节 重组DNA技术在医学中的应用 Application of Recombinant DNA Technology in Medicine 一、重组DNA技术广泛应用于生物制药 利用基因工程生产有药用价值的蛋白质、多肽产品已成为当今世界一项重大产业，并将有望成为21世纪的支柱产业。 美国Eli Lilly公司于1982年首先利用重组DNA技术合成人胰岛素并投放市场，标志着生物工程药物时代的开始。迄今为止，已有50多种基因工程药物上市，近千种处于研发状态，形成一个巨大的高新技术产业，产生了不可估量的社会效益和经济效益。 重组DNA医药产品 产 品 功 能 组织胞浆素原激活剂 抗凝 血液因子VIII 促进凝血 颗粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子 剌激白细胞生成 促红细胞生成素 剌激白细胞生成 生长因子(bFGF, EGF) 刺激细胞生长与分化 生长素 治疗侏儒症 胰岛素 治疗糖尿病 干扰素(? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些肿瘤 白细胞介素 激活、剌激各类白细胞 超氧化物歧化酶 抗组织损伤 单克隆抗体 利用其结合特异性进行诊断试验、肿瘤导向治疗 乙肝疫苗(CHO, 酵母) 预防乙肝 口服重组B亚单位菌体霍乱菌苗 预防霍乱 二、重组DNA技术还应用于医学的其他诸多方面 疾病相关基因的发现与鉴定 转基因和基因打靶 加速了人类基因组计划的完成 疾病的基因诊断和基因治疗 What genes are? How they act? * * * * * * * 第１章 分子生物学领域第一位独立获得诺贝尔奖的女科学家，也是世界上第三位独立获诺贝尔奖的女科学家（第一位是波兰著名女科学家玛丽·居里，第二位是英格兰的多罗西·克劳福特·霍奇金，她们两人都是化学家） * * * 第１章 20世纪60年代中期，瑞士微生物遗传学家阿尔伯（Werner Arber，1929－） )根据在实验中观察到的现象，首次提出细菌的限制——甲基化修饰系统机制，并提出在细菌体内存在着一种对DNA有切割降解作用的细菌酶——限制性内切酶，1968年分离出Ⅰ型限制性内切酶。两年后，美国生物学家史密斯（Hamilton Othanel Smith，1931－）分离出Ⅱ型限制性内切酶，另一位美国遗传学家内森斯（Daniel Nathans，1928－1999）运用Ⅱ型酶成功地切割了DNA。 * * 左下角处有超级链接到配伍末端 * * * * * * * * * * * 以 质 粒 为 载 体 的 DNA 克 隆 过 程 原核基因组和真核基因组 真核生物基因组远远大于原核生物的基因组，结构复杂，基因数庞大，具有许多复制起始点，每个复制子大小不一 人类染色体单倍体DNA全长3×109bp，含3~4万个基因。 大肠杆菌DNA全长4.6?106bp，含4000个基因。 原核基因组 Prokaryote Genome 基因组通常仅由一条环状双链DNA分子组成。 基因组中只有1个复制起点。 基因组中的重复序列很少，编码蛋白质结构基因多为单拷贝。 基本结构特点：启动子（promoter）、操纵基因（operator）、调控序列、结构基因（structure gene）、终止子（terminator）。 基因序列是连续的，无内含子结构 连续密码区 mRNA → Protein 基本结构： 结构基因（structural gene）指能转录成为mRNA、rRNA或tRNA的DNA顺序。 结构基因不连续，编码序列被非编码序列打断，分割成几段，编码序列称为外显子(exon)，其间的序列称为内含子(intron),称为断裂基因（split gene）。 非编码区 剪切 编码区