分子遗传学第二章基因的性质教程方案.ppt

由于rII1和rII2的染色体各自能产生裂解途径中所必需的一种酶,所以裂解就能发生,即有野生型表型出现，称这两个rII突变体能互补 与二倍体植物细胞染色体互补作用相类似，T4噬菌体的混合感染使噬菌体染色体处于暂时的“二倍体”细胞状况，在这过程中发生了互补作用。 三、顺反子（Cistron） 不能互补的突变必然影响的是同一功能单位，能够互补的突变必定影响不同的功能单位，通过顺反试验发现的遗传功能单位称为顺反子。rII区段中包括两个作用单位A和B。也就是两个顺反子。 二、T4噬菌体的rII系统 r型突变体：快速溶菌突变体（rapid lysis），Benzer选择rII突变体作研究的优点是：与野生型rII+ 相比具有不同的宿主范围。rII不能在E.coli K上生长提供了一种选择手段。 T4 rII 突变体和rII+在E.coil上的表型 T4 E.coil B E.coil K（λ） rII 大而清晰园 + － rII+ 小而模糊 + + 小而模糊 E.coil B能使rII突变体生长，称为rII的许可性宿主（Permisive host），E.coli K（λ）不能使rII突变体生长，称为rII的非许可性宿主 （Nonpermisive host）。 三、噬菌体的杂交和选择 用两种不同的rII突变体感染同一细菌E.coli B，一旦 进入细胞，T4之间的DNA就发生重组，从而产生重组类型的噬菌体。然后感染E.coli K，野生型重组体的数目等于在K上的pfu/ml的数（Plague forming Unit） 优点：用rII系统和两个宿主，不需要筛选大量的噬菌斑就能选择到极少发生的重组体。 两个不同突变的噬菌体DNA重组的过程 用两个不同突变体的噬菌裂解液加到E.coli B株的肉汤培养液中，当二个突变类型的DNA感染同一细菌时可发生杂交。大多数复制的DNA是原来的类型，有时也能重组产生一种双重突变型和正常的重组体（即野生型）。杂交后代植到E.coli B上后，都能良好生长，而植于E.coli K时，只有重组野生型才能生长，双突变体重组型不能生长。 Mix the two phages Coinfect E.coli B A A r103 r104 Wild type Double mutant phage Take some of the phage preparation,dilute it(10-8), and infect E.coli B Take some of the phage preparation,dilute it(10-3 ), and infect E.coli K Plate the cells and observe the number of plaques. Total number of phages Wild type phages produced by intragenic recombination 两个不同突变的噬菌 体DNA重组的过程 四·基因内重组 Intragenic Recombination 将8个独立而来的rII突变体成对感染E.coli B。形成噬菌斑后再将其裂解液接种感染E.coli K，只有野生型重组体rII ? 才能生长，而双重组型（rII’rII’’）不能捡出，也不能生长。因此计算重组体的方法是以野生型的数×2。 公式如下： 重组率= 2×rII+ 噬菌体数 总 噬 菌 斑 数 ＝ 2×在K上生长的噬菌体数 在B上的噬菌斑数 ×100% T4 rII位点基因内重组的选择。rII不能在K上生长，当二个带有rII不同等位基因的T4感染同一B株后，其某些后代能在K上生长，即已成为rII?，结果说明在一个基 因内发生了重组，而不是在基因间。 E.coli B rII ’ rII ” 植于E.coli K上选择 根据重组率所得基因图： rII1 rII7 rII4 rII5 rII2 rII8 rII3