MACC1基因在人卵巢癌顺铂化疗耐药株中表达及对细胞耐药性影响.pdf

摘要 MACCl基因在人卵巢癌顺铂化疗耐药株中的表达 及对细胞耐药性的影响 硕士研究生：李霞 导 师：史惠蓉教授 郑州大学第一附属医院 妇产科 河南郑州450052 摘要 背景及意义 卵巢癌是女性生殖器最常见的三大恶性肿瘤之一。卵巢癌起病比较隐匿、 原发病灶不易被发现、癌灶容易扩散转移、首次发现已多为晚期，再加上化疗 耐药及手术后容易复发等特点，卵巢癌患者的死亡率居妇科三大恶性肿瘤之首， 5年生存率仅为30％。卵巢癌已成为严重威胁妇女健康和生命的主要妇科肿瘤。 近年来，研究人员投入大量的精力试图阐明卵巢癌发生发展机制，虽然已经在 卵巢癌的早期诊断方面取得了很大的进展，但目前卵巢癌的发病机制及耐药途 径仍不是十分清楚。 结肠癌转移相关基因l(metaStasis．associated in colon callc*l MACCl)是 Stcin等于09年通过全基因表达分析在结肠癌的原发灶和转移灶中发现的一个与 结肠癌密切相关的基因。研究发现，MACCl在胃癌、肺癌、肝细胞癌、胰腺癌 和卵巢癌等组织中出现异常高表达，促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移，可作 为评价其预后和转归的肿瘤标志物。肝细胞生长因子(h印atoc”e growⅡl factor， HGF)，能促进多种肿瘤细胞的生长、转移、粘附及侵袭，而HGF／C-met信号 通路中调节met基因的关键因子是MACCl基因。目前，MACCl在卵巢癌化疗 耐药细胞株的表达是否异常，MACCl的异常表达导致卵巢癌耐药细胞对化疗药 物顺铂(cisplatin，DDP)的敏感性如何变化等问题仍然不是很清楚。 摘要 目的 检测MACCl基因在顺铂耐药细胞株SKOVl3／DDP及其亲本敏感细胞株 SKOV-3中的表达差异，探讨以MACCl基因为靶向的RNA干扰后能否有效逆 转SKOV-3／DDP细胞对DDP的耐药性。 材料和方法 1．采用逆转录(I盯)．PCR和蛋白印迹(West锄blot)法检测MACCl mIⅢA 和蛋白在SKOV-3／DDP及SKOV-3细胞中的表达差异。 2．siIⅢA转染至SK01弘3／DDP，ImPCR和W-est锄blot法检测转染后各组 细胞中MACCl的表达。 3．MTT法检测转染细胞对顺铂的耐药性情况。 4．流式细胞学检测顺铂加药前后各组细胞的凋亡情况。 5．采用SPSS 16．0统计学软件进行统计学分析。计量资料结果以平均值土 标准差(X妇)表示，两组数据之间使用成组f检验，两组以上的数据采用单因 素方差分析。以PO．05为差异有统计学意义。 结果 1．SKOV．3／DDP细胞中MACCl mRNA的相对表达量是SKOV．3细胞的 (2．66士O．54)倍，蛋白表达量是SKOV-3细胞的(1．95士O．45)倍，差异均有统计学意 义俨0．05)，表明MACCl在卵巢癌DDP耐药细胞株SKOV-3／DDP中的表达较 亲本细胞株SKov_3明显升高。 2．以未转染组SKOV．3／DDP细胞MACCl的表达水平为1oo％，shIⅢA转 染组SKOV．3／DDP．sllMACCl细胞MACCl的mRNA水平下降(83．39士1．26)％， 蛋白水平下降(82．25士2．94)％，两组差异有统计学意义(PO．05)。空质粒转染 组SKOV．3／DDP．shVeCtor细胞MACCl的RNA和蛋白水平是未转染组 SKOV．3仍DP细胞表达水平的(104．55士6．35)％和(105．66士5．98)％，两组差异无 统计学意义(胗0．05)。表明以MACCl基因为靶向的shRNA能有效而特异地沉 默MACCl基因，抑制MACCl的表达。 3．与未转染SKOV．3／DDP细胞、空质粒转染组SKOV．3／DDP．shVector细胞 相比，SKOV．3／DDP．s怂似CCl细胞与顺铂孵育后的细胞抑制率明显升高； lT 摘要 SKOV-3-s怂压ACCl细胞对顺铂的IC50为(26．09士O．91)Ilm01／L，与未转染组细胞 (47．5Q士0．40)pmol／L、SKOV一3-shVector细胞(47．08士0．45)“m01／L比较，差异 有统计学意义CPO．05)；SKOV．3．sllVector细胞与未转染组细胞比较，差异无统 计学意义p0．05)。说明MACCl表达下调后，在卵巢癌中能增强顺铂的抗肿瘤 作用。 4．MACCl一sllI斟A转染组SKOV-3／DDP．shMACCl细胞凋亡率为 (13．77士O．60)％，与空质粒转染组SKOV-3／DDP．shVector细胞凋亡率(4．23士O．30) ％及未转染组SKOV-3／DDP细胞凋亡率(3。63士0．30)％相比明显升高，差异有统 计学意义(尸O．05)。而空质粒转染组与未转染组相比，差异无统计学意义