7蔬菜中维生素c含量测定.ppt.pptVIP

营养与食品卫生学教研室 维生素C是一种己糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以又称作抗坏血酸。维生素C广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑桔等食品中含量尤丰富。 维生素C具有较强的还原性，对光敏感，氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸，仍然具有生理活性。进一步水解则生成2，3 -二酮古乐糖酸，失去生理作用。 根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量。常用的测定方法有： （1）2，6-二氯靛酚法? （还原型VC） （2）2，4-二硝基苯肼法? （总VC） （3）碘酸法 （4）碘量法 （5）荧光分光光度法 【目的】 1．了解蔬菜中维生素C测定的原理。 2．掌握定量测定蔬菜中维生素C的基本操作技术。 【原理】 总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸， 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸， 再与2，4-二硝基苯肼作用生成红色的脎，根据脎在硫酸 溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色定量。 【仪器】 1．组织捣碎机 2．刻度吸管 3．100ml容量瓶 4．50ml具塞量筒 5．烧杯、三角烧杯 6．电炉、滤纸 7．漏斗 8．移液管 9．水浴锅 10．722分光光度计 【试剂】 1．9N硫酸 2．2%2,4-二硝基苯肼溶液 3．10%硫脲 4．85%硫酸 5．活性碳 6．1%草酸溶液，2%草酸溶液。 7．标准抗坏血酸储备液 8．标准抗坏血酸应用液 样品分析（全部实验过程应避光） （1）样品提取 均匀取样100g，剪碎置捣碎机中，按1：1（w/v）加入2%草酸，制成匀浆，称取匀浆4g加1%草酸稀释后倒入100ml容量瓶中，并以1%草酸冲冼烧杯并入容量瓶稀释至刻度，过滤。 （2）氧化 取上述滤液25ml置100ml锥形瓶中，加活性碳0.5g,振摇1min,过滤，滤液备用。 （3）脎的形成 取试管2支按下表操作。 管号 空白管 样品 样品氧化后滤液（ml） 2.0 2.0 10%硫脲（滴） 1 1 2,4-二硝基苯肼（ml） 0 0.5 37℃保温3h或56℃1h取出，放置室温 2,4-二硝基苯肼（ml） 0.5 0 样品分析（全部实验过程应避光） （4）脎的溶解 各管置冰水浴中，分别滴加85%硫酸2.5ml，边加边振动。加完后从冰水中取出室温放置30min，在490nm波长下进行比色，以空白管调零，测样品管吸光度值。 样品分析（全部实验过程应避光） 2、标准曲线制备 （1）氧化 取标准抗坏血酸应用液25ml于100ml锥形瓶中，加活性碳0.5g，振摇1min,过滤。取滤液10ml于100ml容量瓶中，用1%草酸稀释至刻度(含抗坏血酸10μg /ml)。 （2）脎的形成 取试管5支，按下列顺序操作。 管号 0 1 2 3 4 抗坏血酸标准液(ml) 0 0.5 1.0 1.5 2.0 各管抗坏血酸含量（μg） 0 5 10 15 20 1%草酸（ml） 2.0 1.5 1.0 0.5 0 10%硫脲（滴） 1 1 1 1 1 2,4-二硝基苯肼（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 37℃保温3h或56℃1h取出，放置室温 2、标准曲线制备 （3）脎的溶解 各管置冰水浴中，分别滴加85%硫酸2.5ml，边加边振动。加完后从冰水中取出室温放置30min，在490nm波长下进行比色，以0号管调零，测定各管吸光度值。以吸光度值为纵座标，抗坏血酸含量为横座标绘制标准曲线。根据样品管吸光度值查得样品中抗坏血酸含量（μg）。 式中： X — 样品中总抗坏血酸含量[mg/100g]； C — 样品管中相当于标准抗坏血酸的μg 数 W — 用于测定样液中所含样品的g数 X= 【注意事项】 （1）生蔬菜、水果捣匀浆时可能产生泡沫，为定容准确可加数滴醇以除去泡沫。 （2）处理活性碳时Fe3+检查法。取活性碳洗涤滤液少许，加数滴5%亚铁氰化钾，若不出现兰色，表示无Fe3+；或加数滴1%硫氰酸钾，若不出现红色，也表示无Fe3+。