第六章沉淀法分解.pptVIP

不同有机溶剂沉淀蛋白质的效率受蛋白质种类、温度、pH值和杂质等因素所影响，但大致上以丙酮为最佳，乙醇次之，甲醇更次。 其中乙醇是工业上最常用的沉淀剂。 沉淀过程中应控制好的参数 ① 温度 当乙醇与水混合时，会放出大量的稀释热，使溶液的温度显著升高，对不耐热的蛋白质影响较大。生产上常用搅拌、少量多次加入的办法，以避免温度骤然升高损失蛋白质活力。 另一方面，温度会影响有机溶剂对蛋白质的沉淀能力，一般温度越低，沉淀越完全。 ② 乙醇浓度 通常随着乙醇浓度的上升，蛋白质溶解度下降。 ③ pH值 在确定了乙醇浓度以后，蛋白质的最低溶解度出现在蛋白质的等电点处，因此可以通过调节pH值来选择性分离蛋白质。 ④蛋白质浓度 应避免使用很稀的浓度，因为蛋白质在高浓度下才比较稳定。 有机溶剂沉淀法的优点 某些蛋白质沉淀的浓度范围相当宽，所得产品的纯度较高，从沉淀的蛋白质中除去有机溶剂很方便，而且有机溶剂本身可部分地作为蛋白质的杀菌剂。 缺点： 需要耗用大量的溶剂，而溶剂的来源、贮存都比较困难或麻烦，并且沉淀操作需在低温下进行，使用上有一定的局限性，收率也比盐析法低。 非离子型聚合物沉淀法 许多非离子聚合物如聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和葡聚糖等都可用于沉淀蛋白质，其中最常用的是PEG。 相对分子质量从200到