PKIP表达下调对宫颈癌细胞影响.pdfVIP

5．14，4．98，5．33，4．79，P0．05)，诵m stastistical significance． Conclusion：Down—regulation of RKIP has a certain role in promoting cervical cancer cell proliferation and invision ability in vitro． Postgraduate student：Wang Juan(Obstetrics and Gynecology) Directed by Prof．Ji Xin-qiang KeyWords：fipofecfion method；Raf kinase inhibitor protein；gene；cervical neoplasm 目录 引 言?????????????????????????????????????????一1 第一章实验材料和实验方法????．．??????????????????2 1．1主要的实验材料??????????????????????????2 1．1．1细胞株及主要试剂????????????????????????2 1．1．2质粒????????????????????????????????????????2 1．1．3其他实验试剂??????????????????????????2 1．1．4主要的实验设备?????????????????????????2 1．1．5试剂的配制???????????????????????????3 1．2方法?????????????????????????????????????????．4 1．2．1脂质体转染法建立稳定转染的宫颈癌细胞系?????????????4 1．2．2 Western Blotting检测富颈癌细胞RKIP蛋白表达??????????．4 1．2．3 MTT法检测细胞体外增殖能力??????????????????．．?6 1．2．4软琼脂集落形成实验检测细胞体外生长能力?????????????6 1．2．5 Transwell小室实验检测宫颈癌细胞侵袭能力????????????．7 1．3统计学处理????????????????????????????7 第二章结果?????????????????????????????．8 2．1 宫颈癌细胞中RKIP的蛋白表达???????????????????．．8 2．2检测宫颈癌细胞的体外增殖能力???????????????????8 2．3 宫颈癌细胞的体外非依赖性生长???????????????????9 2．4宫颈癌细胞的体外侵袭能力????????????????????．．10 第三章讨论?????????????????????????????11 结 论??????????????????????????????????????????．．14 参考文献???????????????????????????????15 综j苤?????????????????????????????????17 攻读学位期间的研究成果????????????????????????25 致谢??????????????：??????????????????26 学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明?????????????27 引言 引 言 宫颈癌是女性生殖系统中常见的恶性肿瘤之一?，尽管通过手术治疗及放化疗 等辅助治疗后，绝大多数患者预后较好窿3，但宫颈癌的发病人群趋于年轻化，且一 部分患者仍有转移或着复发的可能性。宫颈癌细胞增殖的影响因素与宫颈癌的转移 和复发密切相关，因此其成为影响子宫颈癌预后的一个重要因素。宫颈癌细胞的增 殖能力越强，宫颈癌发生转移或复发的可能性越大，其预后就越差∞1。因此，尽早 明确抑制宫颈癌细胞增殖的关键因素，明确宫颈癌细胞增殖及转移的机制，有效治疗 宫颈肿瘤，并改善宫颈恶性肿瘤的预后逐渐成为目前妇科肿瘤领域科研研究的热点。 研究表明RKIP等基因虽然并不参与肿瘤的发生，但是其功能的丧失与肿瘤细胞 的增殖及转移有着密切的关系，因此把此类基因称作抑癌基因H1。研究这些基因对 肿瘤的诊断、治疗及预后有着新的科研意义。RKIP成功转染细胞后表达的抑制蛋白 可以抑制肿瘤细胞的增殖，因此成为了目前肿瘤学领域研究的新靶点晡1。研究证实 RAF激酶抑制蛋白(RKIP)在多种恶性肿瘤细胞的增殖中发挥重要作用，而目前科研 领域关于此基因与宫颈癌细胞关系的研究相对较少。 本实验的设计为了进一步揭示RKIP对宫颈癌细胞的作用，采用脂质体转染法把 反义RKIP质粒及空白R