第三节 高速逆流色谱分离技术.pptVIP

第三节 高速逆流色谱分离技术 化学系1303班 郭丽丽 201306311025 目录 一、概述 高速逆流色谱（High-Speed Countercurrent Chromatography,HSCCC）是一种连续高效的液-液分配色谱分离技术。该技术不需要固体支撑体，主要依据物质在两相中分配系数的不同对物质进行分离，相对其他常用色谱（如柱色谱、高效液相色谱等）来说，具有无不可逆吸收和回收率高的特点，特别适合于天然活性成分的分离。 二、HSCCC色谱的工作原理及其特点 1、工作原理 HSCCC色谱包括储液罐、泵、螺旋管分离柱、检测器、色谱工作站或数据采集软件或记录仪以及馏分收集器等部分。 选择溶剂体系 平衡 选择固定相 充满螺旋管柱 高速旋转螺旋管 泵入流动相 流动相流出，注入带分 离的样品 收集馏分 2、HSCCC色谱的特点 ① 应用范围广，适应性好 ② 操作简便，容易掌握 ③ 重现性好，回收率高 ④ 分离效率高，分离量较大 ⑥ 产品纯度高 三、溶剂系统的选择 1、溶剂系统的种类： ①弱极性溶剂体系 ②中等极性溶剂体系 ③强极性溶剂体系 2、溶剂体系选择的步骤 （1）预测要分离物质的极性，粗选一个溶剂体系； （2）取少量样品于上下相各2毫升的溶剂体系中，用TLC进行检测，可加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂体系的极性，直到样品在上下相中的分配比K为0.5~2为止； （3）用HPLC测定K值； （4)用分析型HSCCC进行预分离，再用制备型高速逆流色谱进行分离。 3、选择溶剂时应注意 （1）溶剂不造成样品的分解或变性； （2）样品在溶剂中有足够高的溶解度； （3）样品在溶剂系统中有合适的分配系数值（固定相为管柱总体积的50%以上，分配系数为0.5~2）； （4）固定相能实现足够高的保留。 四、应用 高速逆流色谱在分离纯化木蝴蝶中的黄酮苷类化合物的应用 1、分配系数的测定 利用HPLC测定样品在不同溶剂体系的分配系数。 2、溶剂系统的确定 根据文献及被分离物的性质选择溶剂体系。包括：①氯仿-甲醇-水；②乙酸乙酯-正丁醇-水；③正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水。 此处选用氯仿-甲醇-水（9.5:10:5，体积比）。 3、两相溶剂体系及样品溶液的制备 4、分离 The end,thank you! 谢谢大家！ * * 概述 工作原理 溶剂系统的选择 应用 *