实验四 细菌细胞的特殊染色.ppt

实验六 细菌的特殊染色（芽孢、鞭毛） 一 实验目的 掌握细菌的芽孢、鞭毛染色原理及方法； 辨认细菌鞭毛和孢子的形态； 巩固无菌操作技术。 二 实验原理 芽孢染色 由于芽孢壁厚、透性低、不易着色，应当用石碳酸复红、结晶紫等进行染色菌体和芽孢囊着色，而芽孢囊内的芽孢不着色或仅显很淡的颜色，游离的芽孢呈淡红色或浅蓝紫色的圆或椭圆形的圈。用着色强的染色剂孔雀绿或石碳酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的燃料经水洗后被染色，而芽孢一经染色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体便于区分。 鞭毛染色 在染色前用媒染剂进行处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛的直径加粗，然后在进行染色。 三 实验器材 1.活材料：培养2天的枯草芽孢杆菌，培养18-30小时的大肠杆菌和变形杆菌； 2.染色液和试剂 ：Tyler法染色液：复红染色液、香柏油、二甲苯、蒸馏水、5%孔雀绿水溶液、0.05%碱性复红、0.1%美蓝染色液等； 3.器材： 载玻片、 擦镜纸、显微镜、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯、镊子等 四 实验方法步骤 （一）芽孢染色——Schaeffer与Fulton氏染色法 （1）涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。 （2）晾干固定：待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过2—3次。 （3）染色： ①加染色液：加5%孔雀绿水溶液于涂片处（染料以铺满涂片为度），然后将涂片放在铜板上，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽时开始计算时间，约维持15-20min。加热过程中要随时添加染色液，切勿让标本干涸。（加热时温度不能太高）。 ②水洗：待玻片冷却后 ，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。 ③复染：用蕃红液染色5min。 （4）水洗、晾干或吸干。 （5）镜检：先低倍，再高倍，最后在油镜下观察芽胞和菌体的形态。。 结果：芽胞呈绿色，菌体为红色。 （二）鞭毛染色 ——硝酸银染色法 （1）清洗玻片? （2）菌液的制备及制片 （3）染色 ①滴加A液，染4—6min。 ②用蒸馏水充分洗净A液。 ③用B液冲去残水，再加B液于玻片上，在酒精灯火焰上加热至冒气，约维持0.5—1min（加热时应随时补充蒸发掉的染料，不可使玻片出现干涸区）。 ④用蒸馏水洗，自然干燥。 （4）镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查。 结果：菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。 （三）运动性的观察 1 制片：在干净的载玻片上滴一滴生理盐水，取一环菌液与之混合，加0.01%美蓝与之混合均匀，盖上盖玻片； 2 镜检：先用低倍镜找到目标，在用高背镜观察，可用油镜观察，但注意盖玻片的厚度。 结果：有鞭毛菌做直线、波浪式或翻跟斗运动。 五 实验报告及作业 一）结果 1绘出所用材料的芽胞和菌体的形态图 2 给出鞭毛菌的形态图 二）思考 1 在芽孢染色涂片上为什么有时会出现大量游离的芽孢？ 2 芽孢和鞭毛染色中对菌龄要求有何特点？为什么？ * * * * * 球菌(coccus) 四联球菌(tetrad) 球菌(coccus) 葡萄球菌(streptococcus) 球菌(coccus) 八叠球菌(sarcina) 杆菌(bacillus) 不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。 炭疽芽胞杆菌 3-10 μm 大 中 大肠埃希菌 2-3 μm 螺形菌(spiral bacterium) 弧菌 螺菌 螺杆菌 肺炎链球菌荚膜 荚膜 炭疽芽胞杆菌 肉毒梭菌 破伤风梭菌 单毛菌 双毛菌 丛毛菌 周毛菌 注意事项：染色加热过程要及时补充染液，切勿让涂片干涸。