丁娟娟定稿论文.docVIP

题 目：酵母辅酶Q生物合成甲基转移酶 的分离及SDS分析 姓 名： 丁娟娟 学 号： 200907020047 系 别： 生命科学系 专 业： 生物工程 年级班级： 2009级生物工程 指导教师： 陈良兵 2013年6月2日 毕业论文（设计）作者声明 摘 要 1 引言 1 1. 材料与方法 2 1.1 实验所用的材料和仪器 2 1.1.1 实验材料 2 1.1.2 实验仪器和药品及试剂 2 1.1.3 培养基配制 3 1.2 实验方法 3 1.2.1 米酒中酵母的富集 3 1.2.2 酵母增殖液中酵母的分离纯化 4 1.2.3 酵母的扩大培养及生长曲线的测定 4 1.2.4 酵母细胞的破碎 4 1.2.5 甲基转移酶的初步分离 4 1.2.6 甲基转移酶的SDS分析 5 2. 结果与分析 5 2.1 酵母菌分离结果 5 2.2 酵母菌显微镜检测结果 6 2.3 酵母菌纯化结果 6 2.4 酵母菌生长曲线 7 2.5 结果分析 8 3. 结论 8 参考文献 9 致 谢 11 酵母辅酶Q生物合成甲基转移酶的分离 及SDS分析 摘 要：本文以米酒为材料，从中筛选出酿酒酵母，将其作为菌种。通过分光光度法测定酵母的生长曲线。收集对数期酵母细胞并将菌体细胞通过超声波破碎，然后离心分离得到粗酶液，采用凝胶层析的方法对粗酶液进行分离，将分离出的各管粗酶液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，根据甲基转移酶的分子量范围，通过对甲基转移酶所在管粗酶液电泳从而将甲基转移酶初步分离纯化。 关键词：酵母；辅酶Q生物合成甲基转移酶；离心分离；聚丙烯酰胺凝胶电泳 The Primary Purification and SDSAnalysis of Coenzyme-Q Biosynthesis Methyltransferase Enzyme in Saccharomyces Cerevisiae Abstract: In this study, Saccharomyces cerevisiae was screened from rice wine. The growth cruve of yeast was determined using spectrophotometry. The cells of yeast were broken by ultrasonic, then the broken cells were centrifugaled and obatained the supernatant. The supernatant was separated through the chromatography and got the separated simples. Finaly, the separated simples were analysised using SDS. The results showed that the methyltransferase was primary purified. Key words: Yeast; Coenzyme-Q biosynthesis methyltransferase; Centrifugation; SDS 引言 甲基转移酶是生物有机体内普遍存在的一种重要酶类，它能催化遗传物质DNA的甲基化，在基因表达及动物生长、发育中起着重要的调控作用；同时，又能催化多种生理过程中间产物的甲基化进而合成或降解生理活性物质[1-2]。 本研究通过对酿酒酵母的筛选纯化[3-5]，在低温条件下将酵母细胞破碎提取粗酶液。通过文献得知该甲基转移酶的分子量，采用葡聚糖G-75柱层析分离出多组粗酶液，并利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS，Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electropheresis)将甲基转移酶初步分离[6-8]。整个酶提取过程均在4℃条件下进行，从而保持甲基转移酶的活性，保证实验结果的科学性及严谨性。 本文之所以选取酵母为取材对象，是因为目前酵母作为高等真核生物特别是人类基因组研究的模式生物，其最直接的作用体现在生物信息学领域。当人们发现了一个功能未知的人类新基因时，可以迅速地到任何一个酵母基因组数据库中检索与之同源的功能已知的酵母基因，并获得其功能方面的相关信息，从而加快对该人类基因的功能研究。研究发现，有许多涉及遗传