营养缺陷型菌株的的筛选(精选).docVIP

营养缺陷型菌株的的筛选 摘要：野生型菌株经过物理因素或化学因素处理，使基因发生突变，丧失合成某一物质（如氨基酸、维生素、核苷酸等）的能力，因而它们不能在基本培养基上生长，必须补充某些物质才能生长。这样从野生型经诱变筛选得到的菌株，称为营养缺陷型。筛选营养缺陷型菌株以下几个步骤：诱变处理、淘汰野生型、检出缺陷型、鉴定缺陷型。本实验是以大肠杆菌为材料，所以根据细菌的特性分别说明筛选的步骤。经初步确定为营养缺陷型的菌用生长wangjianfu (Shenyang Agricultural University Land and Environment Institute，Liaoning Shenyang 110161) Abstract : So they can grow in the basic medium only when certain substances was added .This strain is called Auxotrophic strain, inducing from the wild-type strains. Screening Auxotrophic Mutants has the following steps: induce the wild strain，eliminate Wild-type，found defective strain, identify the defective strain. E. coli is used in this experiment as material. And screening steps are illustrated respectively, according to the characteristics of bacterial. Auxotrophic strain identified preliminary will be (have been) tested with the method of identification spectrum for further study. Keywords: Auxotrophic mutant;Mu tagenesis;Purification 1前言 野生型菌株经过人工诱变或者自然突变失去合成某种营养（氨基酸，维生素，核酸等）的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长，成为营养缺陷型（auxotroph）。营养缺陷型是一种生化突变株，它的出现是由基因突变引起的。遗传信息的载体是一系列为酶蛋白编码的核酸系列，如果核酸系列中某碱基发生突变，由该基因所控制的酶合成受阻，该菌株也因此不能合成某种营养因子，是正常代谢失去平衡。 　　营养缺陷型菌株的筛选一般包括诱发突变,淘汰野生型菌株,检出缺陷型,鉴别缺陷种类等步骤. 用于诱发营养缺陷型的诱变剂有亚硝基胍,紫外线,亚硝酸等,其中亚硝基胍的诱发突变率极高,一般可达10%以上,另外,随着诱变剂量的提高突变频率也追加 诱变剂的作用主要是提高突变频率，它分为物理和化学的二类。物理诱变剂常用的有X射线、紫外线、快中子、γ射线等诱变处理首先是选择诱变剂，微生物诱变中最常用的物理诱变剂是紫外线。 诱变剂所处理的微生物，一般要求呈单核的单细胞或单孢子的悬浮液，分布均匀，这样可以避免出现不纯的菌落。用于诱变处理的微生物一般处于对数生长期，那时的细菌对诱变剂的反应最灵敏。 诱变处理必须选择合适的剂量，剂量的表示有二种，绝对剂量和相对剂量。绝对剂量的单位以尔格/cm2表示，一般用相对剂量。相对剂量与三个因素有关，这三个因素是：诱变源和处理微生物的距离，诱变源（紫外灯）的功率，以及处理的时间。前二个因素是固定的，所以通过处理时间控制诱变剂量。各种微生物的处理最适剂量是不同的，须经预备实验确定。 2.在诱变之后存活的菌体中,存活的营养缺陷型菌株的数量很少,而野生型细胞却大量存在, 必须设法淘汰野生型细胞，提高营养缺陷型细胞所占比例，以达到浓缩缺陷型的目的。细菌中常用的浓缩法是青霉素法。青霉素是杀菌剂，它只杀死生长的细胞，对不生长的细胞没有致死作用。所以在含有青霉素的基本培养基中野生型能长而被杀死，缺陷型不能长被保存得以浓缩。3.经过第二步,野生型的细胞和营养缺陷型细胞数量比例发生很大变化,但是终究还是混合体,要设法把缺陷型菌株从群体分离检出,检出缺陷型的方法有逐个测定法、夹层培养法、限量补给法、影印培养法。这里主要以逐个测定法为例进行说明。把经过浓缩的缺陷型菌液接种在完全培养基上，待长出菌落后将每一菌落分别接种在基本培养基和完全培养基上。凡是在基本培养基上不能生长而在完全培养基上能长的菌落就是营养缺陷型。 　4.缺陷型菌株的鉴定,实际