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选修三基础知识要点 专题1 基因工程 1、基因工程的概念 基因工程在体外DNA重组和转基因技术，是DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。原理：基因重组。 2、基因工程的基本工具 （1） 限制性核酸内切酶（限制酶） 来源：主要从原核生物中来 功能：切磷酸二酯键 特点:具有专一性。 结果:切后形成黏性末端和平末端。 DNA连接酶 种类：E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接， 作用：连接DNA片段中的磷酸二酯键 （3） 运载体（ 必备的特征略） 最常用的载体是质粒，其它载体：噬菌体、动植物病毒 3、基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取 目的基因的获取方法： 从基因文库中获取；利用PCR技术扩增目的基因；通过化学方法人工合成。 第二步：基因表达载体的构建 组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 （复制原点） 第三步：将目的基因导入受体细胞 ①将目的基因导入植物细胞：双子叶植物采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。 ②将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。 ③将目的基因导入微生物细胞：其转化方法是Ca2+ 处理细胞（感受态细胞法），最常用的原核细胞是大肠杆菌 。 第四步：目的基因的检测和表达 ①检测是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术（是否出现杂交带）。 ②检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用分子杂交技术（是否出现杂交带） ③检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是抗原－抗体杂交（是否出现杂交带）。 ④个体生物学水平的鉴定。如：转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。 4、基因工程的应用 （1）植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。 （2）动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。 （3）基因药物：如:胰岛素、干扰素、乙肝疫苗等 （4）基因治疗：有体外基因治疗和体内基因治疗。 5、蛋白质工程 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质） ? 选修3 专题2 细胞工程 一、植物细胞工程（包括植物组织培养和植物体细胞杂交技术） 1.植物组织培养技术理论基础（原理）：细胞全能性 全能性大小：受精卵＞生殖细胞＞干细胞＞体细胞；植物细胞＞动物细胞 2.植物组织培养技术 （1）条件：离体（外植体）、无菌无毒、固体培养基（蔗糖、无机盐、水等）、植物激素（生长素、细胞分裂素）、温度和PH 脱分化 再分化 （2）过程：离体的植物器官、组织或细胞———→愈伤组织——―→试管苗 ―→植物体 （3）用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、突变体的利用、细胞产物的工厂化生产。 （4）地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。 3.植物体细胞杂交技术 （1）植物体细胞杂交原理:细胞膜的流动性 （2）过程： （3）去壁方法：酶解法（纤维素酶、果胶酶）； （4）诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。 化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。 （5）融合细胞染色体组：两细胞染色体组数之和。 （6）意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。 二、动物细胞工程（包含动物细胞培养、动物细胞融合、动物体细胞核移植、制备单 克隆抗体等） 1. 动物细胞培养 （1）动物细胞培育是其他动物细胞工程的基础。 （2）动物细胞培养的流程： 取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）剪碎用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬浮液原代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理传代培养。 （3）动物细胞培养需要满足以下条件 ①无菌、无毒的环境：通常还要在培养液中添加一定量的抗生素除菌，或定期更换培养液 ②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入 血清、血浆等天然成分。 ③温度和PH：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃；pH：7.2～7.4。 ④气体环境：95%空气＋5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。 2.动物体细胞核移植技术和克隆动物 （1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。 （2）选用去核卵(母)细胞的原因： 卵(母)细胞