第七章之后四基因治疗.pptVIP

基因治疗 1.基因治疗历史与现状 20世纪80年代初，Cline首次对β-珠蛋白生成障碍性贫血患者进行基因治疗尝试 1990年9月，美国批准世界上首个基因治疗方案。腺苷酸脱氨酶（ADA）基因。 1989-1995，企业界投入10亿美元从事研究； 1995-1996年，NIH对美国已进行的103个基因治疗研究方案进行了评估；急功近利、不切实际； 1996年，载体研究初见成效，非病毒型载体改建成功，在细胞中表达效率提高了100倍以上。 开展基因治疗临床试验的主要国家和地区 已进行基因治疗临床试验的受试对象与疾病类型 基因治疗临床试验所采用的主要载体与转移方法 2.基因治疗的概念与策略 基因治疗的定义： 将正常功能性基因置换或弥补缺陷基因的手段，广义地讲，即将新的遗传物质转移进某个体的细胞内从而获得治疗效果，导入的基因可以是与缺陷基因对应的功能性同源基因，也可以是与缺陷基因无关的治疗基因。 基因治疗的策略 基因置换(gene replacement) 基因修复(gene correction) 基因增补(gene augmentation) 基因失活(gene inactivation) 免疫调节(immune adjustment) 基因治疗的途径 in vivo，称为活体直接转移，指将外源基因直接注入体内有关的组织器官，使其进入相应的细胞。更简单、直接和经济，疗效也比较确切，常用的体内基因直接转移手段有病毒介导、脂质体介导和基因直接注射等。 ex vivo，称为在体转移，指在体外将外源基因导入细胞，再将这种细胞回输到病人体内。该方法经典、安全且效果容易控制，但技术复杂。 3.基因转移的方法 物理方法：包括裸DNA直接注射、微粒轰击、电穿孔、显微注射等。 化学方法：磷酸钙共沉淀法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体转染法等。 生物学方法：逆转录病毒载体、腺病毒载体、单纯疱疹病毒载体、腺相关病毒载体、嵌合病毒载体。 几种常见的基因导入靶细胞的方法的比较 基因治疗的载体 可分为病毒性载体和非病毒性载体两大类。 病毒性载体包括逆转录病毒（Rt）、腺病毒（Ad）、疱疹病毒(HSV)及腺相关病毒（AAV）等。 非病毒性载体主要包括脂质体、分子偶联载体、裸露DNA等 常见病毒载体的优缺点比较 常见病毒载体的优缺点比较（续） 4.基因治疗的靶细胞 生殖细胞基因治疗(germ cell gene therapy) 精细胞、卵细胞、早期胚胎 体细胞基因治疗（somatic cell gene therapy） 造血干细胞、成纤维细胞、肝细胞、肌细胞、淋巴细胞 靶细胞的选择需考虑：①最好为组织特异性细胞； ②细胞较易获得，且生命周期长； ③离体细胞较易受外源基因的转化； ④离体细胞经转染和一定时间培养后再植回体内，仍较易成活。 造血干细胞 优点：骨髓移植技术相当成熟；骨髓造血干细胞具有不断分裂，分化成各种血细胞的潜能；基因产物在骨髓细胞成熟后可以通过血液循环遍布全身。 缺点：骨髓造血干细胞在骨髓细胞中所占比例很低，仅0.1%。 成纤维细胞 容易获取和体外培养，也容易植回体内；易转染、并能稳定地表达外源目的基因，合成和分泌的蛋白质可通过血液供各种类型细胞使用；植回的成纤维细胞很容易被取出。 肝细胞 肝脏是人体代谢过程的中心，是基因治疗的重要靶器官。 肌细胞 肌肉组织数量大，易获取；成肌细胞容易分离培养，并易于基因转移；基因转移成肌细胞易移植回肌肉，并易与原位肌纤维融合；丰富的血管可以将基因产物运输到全身。 淋巴细胞 在提取、体外培养、回输体内、基因转移效率和体内高效表达等方面均不存在问题。唯一的缺点是回输体内后的寿命不长，需要经常输入。 可供基因治疗选择的某些遗传病 5.恶性肿瘤的基因治疗 细胞因子导入疗法 “自杀”基因疗法 肿瘤抑制基因疗法 耐药基因疗法 反义基因疗法 细胞因子导入疗法：细胞因子是免疫活性细胞分泌的蛋白多肽类物质，它们可以作用于细胞本身和其他细胞。将许多编码细胞因子的基因作为目的基因导入细胞，使其在宿主或局部肿瘤中稳定、持续表达，通过增强肿瘤微环境中抗癌免疫达到治疗的目的。 自杀基因治疗：就是将细菌、病毒和真菌中特有的药物敏感基因导入肿瘤细胞，通过此基因编码的特异性酶类将原先对细胞无毒或毒性极低的药物前体在肿瘤细胞中代谢成有度的产物，以达到杀死肿瘤细胞的目的，也称前药转换疗法。 肿瘤抑制基因疗法：肿瘤抑制基因的失活与肿瘤发生密切相关。将正常的肿瘤抑制基因导入肿瘤细胞中可代替和补偿缺陷的基因，以抑制肿瘤的生长或逆转其表性，这种替代疗法是从根本上攻克肿瘤的关键环节。 耐药基因疗法：药物耐受是肿瘤治疗中常见的问题，它同时也明显阻碍