透射电镜样本的制备案例.pptVIP

判断切片厚度：利用切片反射的光和从切片下水面反射光发生干涉，不同厚度切片在显微镜下呈现不同的干涉色，干涉色与切厚度的关系是： 灰色 40-50nm 分辨率高，反差小 银白色 50-70nm 金黄色 70-90nm 分辨率低，反差好 紫色 90nm以上 电子束不易穿过 FORMVAR膜制备 Formvar（PVF）溶于纯二氯乙烯制成0.2-0.5%的制膜液 染色 组织细胞的成分主要由碳、氢、氧、氮等低原子序数的元素组成，不能形成足够的反差。 利用重金属离子对不同细胞结构的结合能力不同，使各细胞结构对电子产生不同散射程 度以增强反差。 染色剂 30min左右 与CO2接触会形成不溶性碳酸铅沉淀 10min左右 半薄切片制作 可进行定位，克服超薄切片盲目性，提高电镜观察的效果。 修块时，将切片修得大一些，切成1μm的厚片，甲苯胺蓝染色观察。 超薄切片制样程序 2-3%戊二醛固定液中 4℃，2小时或更长时间。 磷酸缓冲液漂洗 3次，每次15min。 1%锇酸 2h 磷酸缓冲液漂洗 3次，每次15min。（可4℃过夜） 取材：处死实验动物后半分钟到1分钟内，最多15分钟取出1mm3的组织块 固定： 50%丙酮 15min 70%丙酮 15min 90%丙酮 15min 100%丙酮 2次，每次20min 脱水： 100%丙酮：Epon812=2:1 1h; 100%丙酮：Epon812