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婆枣根部内生细菌多样性的研究 姓名：张青 指导老师：崔娜 完成时间：2014.5 研究目的 　　　 本实验采用传统培养方法，从新鲜婆枣根部分离、纯化根部内生细菌，研究婆枣根部内生细菌的多样性。可为开发婆枣细菌资源提供基础。 实验结果及分析 　　　 PCR扩增 将分离的细菌选取19个菌株进行标号（1,2,3……19），并将编号菌种依次命名为TXPZ-01- TXPZ-19。特异性地对16S rDNA 部分区段进行扩增。 　 * * * 论文构架 1 研究目的和研究现状 2 实验方法 3 结果与分析 4 待讨论问题 国内外研究现状 1876年Pasteur首次提取出了内生细菌 国外，从28种健康植物的器官中分离出内生细菌并初步鉴定 国内，起步较晚（20世纪70年代）相继对多种作物内生细菌进行相关研究 研究深入，从30多种植物分离出80个属内生细菌 实验方案 统计内生细菌的种群数量记录其菌落形态特征 生理生化指标简单测定 测定16S rDNA序列 PCR流程图 配置扩增反应体系 PCR扩增 电泳 测序 相似性分析测菌属 构建系统发育树 枣组织 菌落数(×104cfu·g-1) 菌株数 种类 根 10.043 85 11 表1 枣根部组织内生细菌的分布情况 培养基 NA PDA KB TSA CYM KMB 蛋水 牛肉 菌种数 5 5 3 4 2 2 2 3 表2 各种培养基菌种种类数 表3 分离得到婆枣根部内生细菌 菌落编号 大小 形状 颜色 透明 光泽 边缘 凹凸 1 2mm 圆形 绿色 否 无 整齐 凸 2 3mm 圆形 浅黄色 否 有 整齐 凸 3 3mm 椭圆形 白色 是 无 整齐 凸 4 3mm 圆形 棕绿色 否 无 整齐 凸 5 4mm 圆形 乳白色 否 无 整齐 凸 6 2mm 圆形 白色 否 有 整齐 凸 7 3mm 圆形 黄色 否 无 整齐 凸 8 2mm 圆形 白色 否 无 整齐 凸 9 3mm 椭圆形 浅黄色 是 无 整齐 凸 10 2mm 圆形 亮黄色 否 有 整齐 凸 11 2mm 椭圆形 乳白色 是 无 整齐 凸 12 3mm 圆形 白色 否 无 整齐 凸 13 2mm 圆形 白色 否 无 整齐 凸 14 1mm 椭圆形 乳白色 否 有 整齐 凸 15 4mm 椭圆形 白色 是 无 整齐 凸 16 3mm 圆形 浅黄色 否 无 整齐 凸 17 2mm 圆形 浅黄色 否 无 整齐 凸 18 2mm 圆形 乳白色 否 无 整齐 凸 19 3mm 圆形 白色 是 有 整齐 凸 生理生化测定 革兰氏染色 生理生化管反应 大部分为革兰氏阳性菌，少部分为革兰氏阴性菌 图3 电泳图谱 1 2 3 4 5 6 7 M 图4 枣内生细菌及其同源菌株基于16S rRNA序列的系统发育树 菌属 细菌编号 芽孢杆菌属 TXPZ-08 ,04,15 假单胞杆菌 TXPZ-03,17,05 葡萄球菌属 TXPZ-11,18 节杆菌属 TXPZ-10 土壤杆菌属 TXPZ-19 根瘤菌属 TXPZ-01,06,13 湿斯捷连科属 TXPZ-14 寡养单胞菌属 TXPZ-16 土地杆菌 TXPZ-02,12 Aagrobacterium sp. Williamsia sp. TXPZ-07 Pedobacte r Chryseobacterium TXPZ-9 根据菌落菌体形态、培养性状和生理生化特性，结合16S rDNA序列分析可知，共分离出11属。 * *