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毕业论文设计答辩小组：第一小组答辩人：王生瑞专业：生物技术 海绵共附生放线菌的分离分类及初步鉴定 海绵共附生放线菌的分离分类及初步鉴定 2.3 海绵共生放线菌的分离方法 2.4 放线菌的分类鉴定方法 3 结果分析 3.2菌株的分类鉴定 3.2菌株的分类鉴定 4 讨 论 LOGO LOGO 论文框架 1 前 言 2 材 料 与 方 法 3 结 果 分 析 4 讨 论 5 参考文献 1前言 1.1海洋放线菌及其产生的活性物质 1.2 海绵及其共生微生物产生的次级代谢产物 1.3 本论文研究的目的及意义 2实验方法 2.3 海绵共生放线菌的分离方法 2.4 放线菌的分类鉴定方法 3结果分析 3.1海绵共生放线菌的分离结果 3.2菌株的分类鉴定结果 1 2 3 海绵样品的采集与处理 分离培养基的选择 放线菌的分离 形态学特征和培养特征 鉴定 16S rDNA 序列分析及其系统发育分析 3.1分离结果 1对于同一样品，在不同培养基上获得的放线菌数量和种类差别较大，在含有抑制剂的SC淀粉酪素琼脂培养基上分离的放线菌数量多。从菌落表观特征、生长速度、基丝与气丝的形态色泽和孢子特征来看，在SC淀粉酪素琼脂培养基上分离到的放线菌种类也最多。 2实验中从海绵样品中，共分离获得12株放线菌菌株：HNM0046、HNM0047、HNM0048、HNM0050、HNM0051、HNM0055、HNM0060、HNM0061、HNM0064、HNM0071、HNM0080、HNM0083。 高氏一号培养基 SC淀粉酪素培养基 HV培养基 M2培养基 Raffinose-histidine medium 分离到的放线菌种类 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击添加 单击添加 单击添加 单添加 1 形态学特征和培养特征 　　海绵共附生放线菌12株分离菌株在酵母膏麦芽膏培养基（ISP2）中生长良好，形成丰富的气生菌丝和基生菌丝，基内菌丝和气生菌丝高度分支，基内菌丝淡黄色，不断裂，孢子丝颜色早期灰色，培养后期变为黑褐色，孢子链呈螺旋状，表面不光滑，有褶皱。放线菌呈分枝丝状，分支较多交错在一起，由基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三部分组成，基内菌丝为透明，有较多的分枝；气生菌丝较暗。两种菌丝在不同的焦平面上，可以调节细准焦螺旋分别进行观察。由菌落特征，放线菌的细胞有基内菌丝和气生菌丝的分化，气生菌丝到成熟时又会分化成孢子丝并产生成串的干粉状孢子，这些气生菌丝或孢子丝伸展在空气中，菌丝间一般都不存在毛细管水。这就使放线菌获得其特有的与细菌不同的菌落特征：干燥、不透明，表面呈紧密的丝绒状，菌落和培养基的连接紧密，难以挑取菌落。这种形态特征特别符合链霉菌属中典型菌株的形态特征。因此，推测这12株菌株可能属于链霉菌属中的成员。 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击添加 单击添加 单击添加 单添加 2 菌株16S rDNA 序列测定 　　以提取的基因组 DNA 为模板，以 27F、1492R为引物，进行 PCR 扩增，获得菌株HNM0046、HNM0047、HNM0048、HNM0050、HNM0051、HNM0060、HNM0061、HNM0064、HNM0071、HNM0080、HNM0083电泳结果（见图7、图8）。经测序获得菌株HNM0046的16S rDNA近全长序列为1423bp；菌株HNM0047的16S rDNA近全长序列为1420bp；菌株HNM0048的16S rDNA近全长序列为1433bp；菌株HNM0050 的16S rDNA近全长序列为1431bp；菌株HNM0051的16S rDNA近全长序列为1431bp；菌株HNM0060的16S rDNA近全长序列为1428bp；菌株HNM0061的16S rDNA近全长序列为1447bp；菌株HNM0064的16S rDNA近全长序列为1428bp；菌株HNM0071的16S rDNA近全长序列为1438bp；菌株HNM0080的16S rDNA近全长序列为1436bp；菌株HNM0083的16S rDNA近全长序列为1426bp。 3 菌株16S rRNA基因序列分析 　 测得已分离出的这12株菌株的16S rRNA基因序列有效片段长度都在1400bp以上，在Eztaxoon数据库中进行有效种的序列相似性搜索，发现与链霉菌属的菌株高度相关，将每株菌与最相似的标准菌株、以及相似性等做表。 Strain Length Closest match Similarity Acc