肝素的效价测定分析.pptVIP

“ ” “ ” 肝素的效价测定 讲解人：谢文军 肝素的简单介绍 肝素首先从肝脏发现而得名，它也存在于肺、血管壁、肠粘膜等组织中，是动物体内一种天然抗凝血物质。天然存在于肥大细胞，现在主要从牛肺或猪小肠黏膜提取。 肝素是一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。临床上主要用于血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手术、心脏导管检查、体外循环、血液透析等。随着药理学及临床医学的进展，肝素的应用不断扩大。 肝素的效价测定简介 肝素的效价测定采用生物检定法（利用药物对生物体的作用以测定其效价或生物活性的一种方法），比较肝素标准品S与供试品T延长新鲜兔血或兔、猪血浆凝结时间的作用，以测定供试品的效价，是根据对数剂量与血凝时间的对数呈线性关系而设计的。 肝素的效价测定步骤 标准溶液的配置 精密称取肝素标准品适量，按标示效价加灭菌水溶解，使成每毫升含100单位的溶液，分装于适宜的容器内，4~8℃保存。 标准稀释液的配置 精密量取标准溶液，按高、中、低剂量组（ds3、ds2、ds1 ）用0.9%氯化钠溶液配成三种浓度的稀释液，相邻两浓度的比值（r 应相等；调节剂量使低剂量组各管的平均凝结时间较不加肝素的对照组明显延长。 高剂量组各管的平均凝结时间，用新鲜兔血者以不超过60min为宜，其稀释一般可配成每毫升含肝素2~5单位，r为1:0.7左右; 用血浆者以不超过30min为宜，其稀释一般可配成每毫升含肝素0.5~1.5单位，r为1:0.85左右。 供试溶液与稀释液的配置 按供试品的标示量货估计效价（AT 照标准溶液与稀释液的配置法配成高、中、低（dt3、dt2、dt1）三种浓度的稀释液。相邻两浓度之比值（r）应与标准稀释溶液相等，供试品与标准品各剂量组的凝结时间应相近。 血浆的制备 迅速收集兔或猪血置预先放有8%枸橼酸钠溶液（别名：柠檬酸钠，具有抗凝血作用）的容器中，枸橼酸纳液与血液容积之比为1:1.9，边收集边轻轻摇晃，混匀，离心约20min，立即分出血浆，分成若干份装于适宜容器内，低温冻结贮存，临用时置37℃±0.5℃水浴中融化，用两层纱布滤过（主要是滤掉未融化的冰渣），使用过程中在4~8℃放置。 效价检定 ①新鲜兔血：取管径均匀（0.8cm*3.8cm）、清洁干燥的小试管若干支，每管加入一种浓度的标准或供试稀释液0.1ml，每种浓度不得少于3管，并标上A3 、B3 、C3 、A2 、……以示区别，各试管的支数相等。取刚抽出的兔血适量，分别注入小试管内，每管0.9ml，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间，将小试管置37℃±0.5℃恒温水浴中，从采血时起至小试管放入水浴的时间不得超过3min，注意观察和记录各管的血凝血的时间。 ②血浆：取上述规格的小试管若干支，分别加入血浆一定量，置37℃±0.5℃恒温水浴中预热5~10min后，依次每管加入一种浓度的标准或供试稀释液及1%氯化钙液（每种浓度不得少于3管，各浓度的试管支数相等），血浆、肝素稀释液和氯化钙液的加入量分别为0.5ml、0.4ml和0.1ml，加入氯化钙溶液后立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间，注意观察并记录各管的凝结时间，将各管凝结时间换算成对数，照生物检定统计法中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。 “ ” “ ”