第3章鉴别分析.ppt

教学目标 1. 掌握光谱鉴别法的鉴别对象和操作方法 2.熟悉化学鉴别法、光谱鉴别法的注意事项 3.掌握色谱鉴别法的鉴别对象和操作方法 4.熟悉色谱鉴别法的注意事项 二、鉴别方法 化学反应鉴别法 光谱鉴别法 色谱鉴别法 生物学鉴别法 第一节 化学鉴别法 一、定义 药物与一定试剂在适当条件下产生颜色、荧光、沉淀或气体而对该药物进行真伪鉴别的方法。 第二节 光谱鉴别法 第三节 色谱鉴别法 2）比较吸光度比值的一致性 维生素B12注射液：λmax：361nm、550nm A361/A550 3.15~3.45 3）比较吸收光谱特性的一致性 含有共轭体系、芳香环等发色基团，均可在紫外区（200～400nm）或可见光区（400～760nm）产生吸收 药物在可见光区若无吸收，但在一定条件下加入显色试剂或经过处理显色后，能对可见光产生吸收。 （四）应用 二.红外分光光度鉴别法：专属性很强、用于组分单一、结构明确的原料药 （1）概念：红外光区（2.5～25μm）的吸收光谱 （2）主要依据：标准图谱对照法，主要参数是吸收峰的位置和吸收峰的强度，另外还需分析特征区与指纹区的峰形特点 （3）供试品的制备及测定 （4）注意事项 N-H O-H N-H C C 芳胺 酚 1. 概念 2. 常用的色谱鉴别方法 （1）薄层色谱法：Rf （2）纸色谱法：Rf （3）气相色谱法：tR （4）高效液相色谱法：tR 一、薄层色谱法 薄层色谱法（thin layer chromatography，TLC）是一种快速、简便、灵敏的分离检识方法。即将吸附剂均匀地铺在玻璃板上，把欲分析的样品点加到薄层上，然后用合适的溶剂展开而达到分离、鉴定和定量目的的方法。该方法不仅对分离鉴定天然产物成分起到了独特的作用，在分析化学、药物化学、染料、农药等领域，均得到广泛的应用。 （一）操作技术 1、制板 铺板 方法：有干法辅板 软板 和湿法辅板 硬板 。 1 硅胶G板：除另有规定外，取一份硅胶G，加3份纯化水，在研体中研磨均匀成糊状，除去表面的气泡，迅速倾于玻璃板上，振荡均匀，置水平台上室温凉干后，活化，备用。 2 硅胶G-CMC-Na板： 3 氧化铝CMC-Na板：除另有规定外，取1份氧化铝，加3份0.5%～1% CMC-Na水溶液，在研钵中研磨均匀，除去表面的气泡，迅速铺于玻璃板上，振荡均匀，置水平台上室温晾干后，活化，备用。 2、薄层板的活化 将涂铺完成后的薄层板置水平台上室温凉干后： 硅胶板于100～110℃活化30～60分钟，置干燥器中备用。也有的不用活化，铺好阴干后即可使用。 氧化铝薄层板在150～160℃活化4小时，即可得到Ⅲ～Ⅳ活性的薄层板，在200 ℃活化4小时即可得到Ⅱ级活性的薄层板。 3、点样： ①样品溶液配制：将样品溶液配制成1%～2%的乙醇 或丙酮、氯仿 溶液，尽量避免用水，因为水溶液斑点易扩散，且不易挥发除去。 ②确定起始线的位置：在距离薄板一端2cm处用铅笔轻轻划一直线作为起始线。 ③点样：少量多次原则。用平口毛细管将样品溶液吸入管内，点在薄板的起始线上，可在一个原点上反复点2～3次，以增加其点样量，每点一次须待溶剂挥干后再点第二次，斑点直径不要大于3mm，若在同一板上点几个样品，每个斑点间距应保持1.5～2cm 。 4、展开 ①展开剂配制 ②饱和10～15min ③展开方式：近水平展开、上行法、下行法，单向展开、双向展开、单向二次展开等。 5、显色 如果斑点有色，可在日光下直接观察；若有荧光可在紫外灯下观察荧光；如果斑点本身无色又无荧光，可喷洒适宜的显色剂，待斑点显色后，计算Rf值。 二、高效液相色谱法 （一）基本原理 （二）应用 1.对仪器的一般要求 1 色谱柱 反相：十八烷基硅烷键合硅胶 正相：硅胶 离子交换：离子交换填充剂 分子排阻：凝胶或高分子多孔微球 C18硅胶表面 填料直径15nm以下 ＜2000 ＞2000 填料直径30nm以上 温度要求：≤40℃ 流动相pH：2~8 2 检测器 1 2 3 4 5 6 3 流动相 甲醇-水 乙腈-水 尽可能少用含有缓冲液的流动相 2.高效液相色谱系统适用性试验 （1）色谱柱的理论板数（n） （2）分离度（R） 除另有规定外，定量分析时分离度应大于1.5 （3）重复性（R） 连续进样，峰面积，RSD≯2.0% （4）拖尾因子（T） T：0.95～1.05 3.测定方法 （1）内标法 对照品+内标 对照品峰AR 内标物峰As 6min 8min 内标法 ： 是色谱分析中一种比较准确的定量方法，采用内标法 定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。理想地说，内标 物应当是一个能得到纯样的已知化合物，这样它能以准确、已知 的量加到样品中去，它应当和被