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脂肪干细胞的免疫学性质探讨 【摘要】目的 探讨脂肪干细胞免疫学性质。方法 健康志愿者6例，志愿者均与抽脂要求相符，作为研究组；将同期另选6例健康志愿者作为对照组。分别抽取两组健康志愿者脂肪组织25 g，给予培养，并观察目标细胞分化群表面抗原和组织相容性抗原表达的特点，同时对异体脂肪干细胞及淋巴细胞共同培养的增殖情况进行观察。结果 脂肪干细胞没有造血系统污染及内皮细胞污染问题，且对照组与研究组每毫升细胞液细胞数（CPM）比较，差异无统计学意义（P 0.05）。结论 脂肪干细胞有较小排斥反应，临床应引起重视，加强培养及分离技术研究。 【关键词】 脂肪干细胞；免疫学性质 DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.30.079 干细胞是具有自我增殖及更新能力的细胞， 依据不同分化阶段可分为成体干细胞、胚胎干细胞两类。与间质干细胞相对比， 脂肪干细胞（ADSCs）在体外更易扩增， 获得容易， 且免疫原性低， 是临床医学及组织工程发展的重要突破。本探究分析脂肪干细胞免疫学性质， 现报告如下。 1 资料与方法 1. 1 一般资料 搜集本院2014年3月～2015年3月健康志愿者6例， 志愿者均与抽脂要求相符， 作为研究组；另选同期6例健康志愿者作为对照组。纳入标准：均对本研究知情；均身体健康。研究组女3例， 年龄21～37岁， 平均年龄（28.46±3.36）岁；男3例， 年龄20～38岁， 平均年龄（29.65±3.34）岁。对照组女3例， 年龄22～38岁， 平均年龄（28.51±3.29）岁；男3例， 年龄21～38岁， 平均年龄（29.70±3.42）岁。两组健康志愿者性别、年龄一般资料比较， 差异无统计学意义（P 0.05）， 具有可比性。 1. 2 方法 分别抽取两组健康志愿者脂肪组织25 g， 将其放在离心管中， 后转为培养皿中， 准备处理， 离心管与培养皿均为无菌；剔除组织中筋膜及血管， 使用无菌溶液反复进行冲洗；处理后， 用眼科剪对其进行分割， 大小约为1.5 mm3， 直至分割成糊状， 在37℃环境下， 选择Ⅰ型胶原酶（0.1%）予以震荡进行消化处理， 速度为120 r/min；采用LG-DMEM培养液和胎牛血清（10%）终止消化， 并离心10 min， 后获得高浓度的间质组织细胞团， 对其进行处理， 选择红细胞裂解液， 并去除红细胞， 采用筛网（100 μm）进行过滤；将过滤液取出， 使用链霉素100 g/L、青霉素100 U/ml、LG-DMEM培养液、胎牛血清进行重悬处理；处理后， 将其置于培养皿中， 直径为100 mm， 接种， 设定浓度4×104/cm2；接种后， 在体积分数5%CO2培养箱中进行培养， 温度设定为37℃， 且每隔2 d更换一次培养液；待细胞生长检测80%～90%时， 按照比例1∶2进行传代培养。 观察目标细胞分化群表面抗原和组织相容性抗原表达的特点， 方法选择流式细胞术。首先使用BSA-PBS溶液（0.5%）对脂肪干细胞标本进行洗涤， 离心10 min， 1000 r/min， 获取单细胞悬液， 转变细胞浓度1×109/L；其次对组织相容性抗原Ⅰ（MHCⅠ）、MHCⅡ、CD44、CD29、CD90、CD31、CD45、CD34进行荧光标记， 将标记后物质加入悬液， 将其和荧光标记的非特异性IgG同型进行对比分析， 在37℃环境下进行培养， 30 min后， 反复使用PBS进行处理， 使用多聚甲醛予以固定， 用量30 g/L， 最后实施检测， 仪器选择流式细胞仪。 1. 3 观察指标 观察细胞分化群表面抗原和组织相容性抗原表达的特点， 同时对异体脂肪干细胞及淋巴细胞共同培养的增殖情况进行观察。 1. 4 统计学方法 采用SPSS13.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P 0.05表示差异具有统计学意义。 2 结果 2. 1 脂肪干细胞分化群表面抗原和组织相容性抗原表达的特点 采用流式细胞术检测脂肪干细胞分化群表面抗原和组织相容性抗原表达的特点， 阴性表达抗原：CD31（2.81±1.04）%， CD34（17.12±0.54）%， CD45（1.39±0.27）%。阳性表达抗原：CD29（91.22±1.03）%， CD44（90.83±2.37）%， CD90（94.02±0.69）%。由此得知， 脂肪干细胞无造血系统污染及内皮细胞污染问题。 2. 2 淋巴细胞共同培养情况 对照组与研究组CPM比较， 差异无统计学意义（P 0.05）， 表示脂肪干细胞对异体移植的排斥作用较小。见表2。 3 讨论 脂肪的组织基质内存在大量ADSCs， 作为成体干细胞， 具有多向分化潜质， 在