盐酸小檗碱对体外培养人牙周膜细胞分泌白细胞介素-6的影响.pfg.doc

兰州Ｉ大学硕士研究生论文 盐酸小檗碱对体外培养人牙周膜细胞分 泌白细胞介素．６的影响 中文摘要 ／７够．－ ｌ、在成功培养人牙周膜细胞（ＰＤＬＣｓ）基础上，研究不同浓 度脂多糖对人牙周膜细胞分泌白介素．６的影响，以便在体 外细胞药物试验中，确定最佳脂多糖刺激浓度。 ２、研究盐酸小檗碱对体外培养的人牙周膜细胞（ＰＤＬＣｓ）分 泌白细胞介素．６（ＩＬ．６）的影响。 方法： １、利用玻片覆盖法原代培养人牙周膜细胞，并鉴定其来源， 在此基础上，用酶联免疫分析法测定脂多糖对人牙周膜细 胞分泌ＩＬ．６的影响。 ２、自离体牙分离牙周膜组织，体外培养人ＰＤＬＣｓ。经免疫组 化鉴定后的人ＰＤＬＣｓ首先根据细胞培养液中是否含有脂多 糖（ＬＰＳ，５０．ｇ／ｍＥ）分为ｔ组和Ｔ组，然后两组再依据培 养液中盐酸小檗碱的终浓度（Ｏ、Ｏ．０１０、Ｏ．０２０、Ｏ．０３０ ｇ／Ｌ） 分为ｔｏ和Ｔｏ空白对照组、ｔｌ和Ｔ１组、ｔ２和Ｔ２组以及ｔｓ和Ｔ３ 组。应用酶联免疫分析法分别测定各组细胞培养上清中ＩＬ．６ 的含量，并进行统计学分析和比较。 结果： １、四种浓度脂多糖均显著刺激人牙周膜细胞分泌白介素．６， 并在一定范围内呈浓度依赖性。 ２、与其他相应ｔ组和Ｔ组比较，ｔ３组和Ｔ３组细胞培养上清中ＩＬ．６ 含量明显降低，差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）；而ｔ３组较Ｔ３ 组细胞培养上清中ＩＬ．６含量的降低更为明显，差异有统计 学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。 结论： ｌ、在以脂多糖为刺激因素的药物疗效试验中，５０  ｕ  ｇ／ｍＬ脂 兰州大学硕士研究生论文 多糖刺激效果最好。 ２、高浓度盐酸小檗碱（Ｏ．０３０ ｇ／Ｌ）抑制体外培养ＰＤＬＣｓ分泌 ＩＬ。６，当以ＬＰＳ作为刺激因子时抑制作用则更加明显，并在 一定范围内呈浓度依赖性。 ．关键词： 盐酸小檗碱；人牙周膜细胞；内毒素脂多糖；白细胞介素一６ 兰州大学硕士研究生论文 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ  ｏｎ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ—６ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ： １．Ｔｈｒｏｕｇｈ ｏｂｓｅｒｖｉｎｇ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｉｐｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ＬＰＳ）ｏｎ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ．６（ＩＬ．６）ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ １ｉｇａｍｅｎｔ ｃｅｌｌｓ（ＰＤＬＣｓ）．ｔｈｉｓ ｔｈｅｓｉｓ ａｉｍｓ ａｔ ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＬＰＳ ａｓ ｓｔｉｍｕｌａｎｔ ｉｎ ｄｒｕｇ ｔｒｉａｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ． ２．Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ．６ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔ ｃｅｌｌｓ（ＰＤＬＣｓ）ｃｕｌｔｕｒｅｄ／ｎ ｖｉｔｒｏ． Ｍｅｔｈｏｄｓ： １． Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｃｅｌｌｓ ｏｒｉｇｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｅ筒ｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅ ｂｙ ｃｏｖｅｒｉｎｇ ｃｏｖｅｒｓｌｉｐ．ＰＤＬＣｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｅｍｏｌａｒｓ．Ｅｎｚｙｍｅ．１ｉｎｋｅｄ ｉｍｍ 。ｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｘａｍｉｎｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＬＰＳ ｏｎ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＩＬ．６ ｆｒｏｍ ＰＤＬＣｓ． ２． Ｂｙ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｒｏｍ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｈｕｍａｎ ｐｒｅｍｏｌａｒｓ． ＰＤＬＣＳ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ａｆｔｅｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｉｍｍｕｎ ．ｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．ｈｕｍａｎ ＰＤＬＣｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ Ｔ ｇｒｏｕｐ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｗｈｅｔｈｅｒ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ （ＬＰＳ，５０ Ｌｔｇ／ｍＬ）ｗａｓ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ． Ｔｈｅｎ ｉｎ ａｃｃｏｒｄａｎｃｅ ｗｉｔｈ