实验五植物细胞染色体标本的制作与观察.pptVIP

实验五 植物细胞染色体标本的制作与观察 1.实验目的 理解植物染色体标本制作的应用。 掌握常规压片技术。 2. 实验原理 分裂中期的染色体可达到最大收缩状态，具有典型的形态，是观察和度量染色体的最佳时期。秋水仙素（或秋水仙胺）可通过干扰微管组装而抑制纺锤丝形成，使细胞分裂不能顺利进入后期而停滞于中期，从而可以在短期内积累大量最适于进行染色体分析的中期分裂相。此外，秋水仙素还能使染色单体缩短、分开，使染色体呈现明显的外形而利于辨认。 染色体标本制备过程中有两个重要环节，即低渗处理和固定。低渗处理的目的是使水分通过细胞膜向细胞内渗入，导致细胞膨胀，染色体进一步分散，互不重叠而利于分析。固定的目的在于尽快使细胞的结构固定于接近存活状态，以便作进一步处理，若不固定则可因细胞内蛋白质分解而导致结构变化。 3.实验材料、用品 实验材料：市售大蒜与洋葱。 仪器及用具：显微镜，冰箱，恒温水浴锅，电子天平，试剂瓶，烧杯，载玻片，盖玻片，剪刀，镊子，滤纸等 试剂： 0.1% 秋水仙胺，冰醋酸，无水酒精，甲醇，盐酸.等。低渗液：0.075 mol/L KCl，取5.59 g KCl加到1000 mL蒸馏水中，在37℃下预热。 固定液：使用前按甲醇:冰醋酸以3:1(体积分数)配制。染液: Giemsa染液 4.实验步骤 催芽→取材：1~2cm的根尖→预处理：0.1% 秋水仙胺（g/ml）处理3~4小时→固定： 固定液低温固定30分钟，洗净→解离：60度，1M HCl解离5~20分钟→洗涤：若洗不净，则影响染色→Giemsa染液染色5~10分钟→冲洗→压片→观察。 5. 实验结果 植物染色体的组型分析 6.注意事项 注意观察的是根尖细胞，要去除根冠及大部分伸长区细胞，否则会影响观察。为了避免材料在处理中的流失，这一步去除工作可在载玻片上滴加染液时进行。 固定液要现用现配。 压片要充分，力量要均匀适中，保证染色体充分分离且没有损失破坏。 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室 大连理工大学 环境与生命学院 指导教师：唐颖 洋葱根尖细胞中期 洋葱根尖细胞早中期