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微囊藻毒素生物合成基因及其功能研究进展 　　摘 要：水体富营养化加剧，导致了蓝藻水华在世界范围内频发。蓝藻产生的微裳藻毒素是最常见的一种藻毒素，对人类和动物造成了很大的危害甚至导致死亡。微囊藻毒素经非核糖体合成途径由多肽合成酶合成。对微囊藻毒素的结构与性质、微囊藻毒素合成基因的功能及其生物合成、微囊藻毒素的分子生物学检测技术进行了评述，对未来的研究方向进行了展望。 　　关键词：微囊藻毒素；蓝藻：基因；检测 　　中图分类号：Q89 　　文献标识码：A 　　文章编号：1007-7847（2014）05--0445-08 　　随着社会的发展，生活及工农业生产中大量含氮、磷的废污水未经有效处理被排入水体中，导致水体富营养化，蓝藻等藻类成为水体中的优势种群，大量繁殖形成水华，蓝藻水华暴发带来的微囊藻毒素（microcystin， MC）污染已经成为全球关注的环境问题。微囊藻毒素造成了众多中毒事件，对人类和动物的健康造成了很大的威胁。深入认识微囊藻毒素，了解微囊藻毒素的结构、编码基因及其合成，有助于对微囊藻毒素进行有效的监测，对微囊藻毒素的合成进行干预，从而在监测、控制和消除等方面有效解决微囊藻毒素的危害问题，对水体环境的保护具有重要的现实意义。 　　1 　　微囊藻毒素的结构与性质 　　微囊藻毒素是一种单环七肽肝毒素，一般结构为环（D-Ala-X-D-MeASp/D-Asp-Z-Adda―D-Glu-Mdha）（图1）。分子结构1位上是D-丙氨酸（D-Ala）；2、4位上的X和Z分别代表不同的氨基酸；3位上是D-赤-β-甲基天冬氨酸（MeAsp）；5 位上是（2S，3S，8S，9S） -3-氨基―9―甲氧基一2，6，8-3甲基-10-苯基-4，6-_烯酸（Adda）；6位上是D一谷氨酸（D-Glu）；7位上是N一甲基脱氢丙氨酸（Mdha）。其中.Adda是一种特殊氨基酸，是毒素活性表达所必需的基团，其结构改变会导致毒性减弱或丧失。因为结构中存在可变氨基酸，所以微囊藻毒素有多种异构体，目前发现的已经超过90种。其中最普遍、毒性较大的是MC-LR、RR和YR（L、R、Y分别代表亮氨酸、精氨酸和酪氨酸）。 　　微囊藻毒素对蛋门磷酸酶1和2A的活性具有抑制作用及多种毒效应。肝脏是微囊藻毒素主要的靶器官，微囊藻毒素会引起肝脏炎症、肝损坏甚至坏死，另外其还与肿瘤促进作用有联系。腹腔注射小鼠实验发现MC-LR半致死率（lethal dose 50% LD50）为50 μg/kg， MC-RR和MC-YR毒性相对较低。世界卫生组织（WoI-ld Health Or-ganization，WHO）规定饮用水中微囊藻毒素的含量不得超过为1μg/L。微囊藻毒素具有较好的水溶性，在水中的溶解度大于1g/L，另外还能溶解于丙酮和甲醇。微囊藻毒素还具有很高的耐热性，加热煮沸都不能将其去除。由于微囊藻毒素的这些性质，常规的水处理工艺不能将其有效去除，因此对微囊藻毒素的检测以及预防显得尤为重要。 　　2 微囊藻毒素的合成基因及基因功能 　　微囊藻毒素由聚酮合酶（polyketide synthase，PKS）和非核糖体合成酶（non-ribosomal peptidesynthetase，NRPS）等特殊的酶利用氨基酸或者化合物，绕开核糖体，通过非核糖体合成途径完成合成，微囊藻毒素合成基因（microcystin syn-thetase genes，mcy），是第一个被完全测序的蓝藻代谢物合成基因。Tillett等最先解析了微囊藻属（Microcystis） PCC7806的mcy基因，基因全长55kb，包含mcyA -C和mcyD -J两个操纵子，共有10个开放阅读框，主要编码PKS和NRPS。mcyD-j操纵子，编码PKS、NRPS和PKS混合的杂交酶、剪裁酶、以及转运酶；mcyA -C操纵子，主要编码3个NRPS。 　　微囊藻毒素的主要产毒藻种为微囊藻、鱼腥藻（ANABAENA）和浮丝藻（Planktothrix），3个藻属的mcy基因均已测序和鉴定出来，各个藻属mcy基因的基因单元在结构上是相似的，但是在基因的排列上略有不同（图2）。在基因单元方面，对比3个藻属可以发现，浮丝藻属无mcyF和mcyl基因，而多了mcyT基因。在基因排列上，微囊藻属和鱼腥藻属的两个操纵子呈相反方向排列，而浮丝藻属的操纵子呈单向排列（mcyT除外）。 　　下面以微囊藻PCC7806合成微囊藻毒素（MC-LR）为例，根据mcy基因参与合成的顺序详细介绍这10个基因以及它们在合成中的作用（图3）。mcyG、mcyD和mcyE共同完成Adda的合成；mcyE还参与D―谷氨酸和L-丝氨酸的加入；mcyA参与Mdha的加入；mcyB参与L一亮氨酸和MeAsp