基于荧光素汞荧光法结合光纤传感―微顺序注射―阀上实验室测定肠灌流液中H2S.docVIP

基于荧光素汞荧光法结合光纤传感―微顺序注射―阀上实验室测定肠灌流液中H2S 　　摘 要 建立基于光纤传感技术结合微顺序注射-阀上实验室荧光猝灭测定肠灌流液中H2S含量方法。本研究进行单因素考察，确定以100 μL 0.1mol/L NaOH溶液为载液，荧光素汞浓度为5.0×10 Symbolm@@ 5 mol/L、体积50 μL、进样体积50 μL、流通池检测流速25 μL/s，根据H2S猝灭荧光素汞521 nm处荧光，对样品中H2S浓度进行测定。本方法检测H2S的浓度范围为5.0×10 Symbolm@@ 6～8.0×10 Symbolm@@ 5 mol/L，检出限为5.4×10 Symbolm@@ 7 mol/L。测定肠灌流液中H2S含量为3.8×10 Symbolm@@ 5 mol/L，RSD=3.1%（n=3）。本方法能有效在线测定样品中H2S含量，为实时在线测定生物样品中的H2S含量奠定基础。 　　关键词 光纤传感 硫化氢 微顺序注射-阀上实验室 荧光素汞 荧光猝灭 　　1 引 言 　　硫化氢（H2S）是一种具有臭鸡蛋气味的有毒气体，是空气和水源的污染物之一。近研究发现，H2S是继NO和CO之后又一种新型信号分子，作为一种活性神经调节物质广泛存在于动物体内，参与并调节动物体诸多的生理病理活动[1]。目前，H2S的测定方法大多局限于传统方法，如亚甲基蓝法[2]、硝酸银比色法[3]、气相色谱法[4]等。这些传统的方法检出限和灵敏度无法满足生物样品中极微量甚至痕量H2S测定要求。而荧光法的灵敏度更高，测定H2S数量级达到10 Symbolm@@ 6 mol/L。荧光素汞具有很强荧光，H2S中S2 Symbolm@@ 与荧光素汞结合，使荧光素汞荧光猝灭，H2S含量与荧光素汞的荧光强度具有良好的相关性。 　　微顺序注射-阀上实验室（MicroSIA Lab-on-valve，μSIA-LOV）是第三代流动注射分析技术[5]，在μSIA-LOV分析系统中，所有的单元操作，如样品稀释、试剂试样的加入、混合以及多种连用技术的结合，使得整个实验测定过程能够可控、高效地进行。该系统能将试剂及样品消耗降低至微升水平，减少了试剂的使用量，适用于长时间监测和试剂比较昂贵、样品来源受限的分析。LOV系统不仅可以与光纤传感结合，也可以灵活与电化学[6]、色谱[7]、化学发光[8]、固相萃取[9]、原子荧光[10]等方法联用。 　　本研究将光纤传感技术与微量顺序注射-阀上实验室（μSIA-LOV）结合，以光纤作为传导介质，将光纤光谱仪、微顺序注射分析仪八通阀和氙灯光源连接，用计算机控制，利用该系统自动介观流控特征与光纤传感的实时监测相连，可以实现样品的在线监测。本研究以Na2S为供体，建立光纤传感-微量顺序注射-阀上实验室检测肠灌流液中H2S的分析方法，为进一步进行动物在体肠灌流H2S或H2S供体药物的肠吸收特性研究奠定分析基础。 　　2 实验部分 　　2.1 实验装置 　　微量顺序注射仪（美国FIAlab Instruments公司）;光纤光谱仪（QE65000-FL，CCD）、连续氙灯光源（HPX-2000）、200 μm×1 m光纤两根均为美国Ocean optics公司产品。PB-10型pH计（德国Sartorius公司）;实验流路所用连接管道采用PTFE管（0.75 mm，I.D.）。分别采用安装有FIAlab for Windows和SpectraSuite 软件的Windows XP系统台式电脑对微量顺序注射分析仪和光纤光谱仪进行控制。光纤传感-微顺序注射-阀上实验室仪器装置：包含一个1000 μL高精密度注射泵、一个棕色滤光8通道的多位阀模块（LOV），在该模块上集成了一个中心控制通道、多个工作通道及一个多功能流通池等操作单元;通过软件调节控制中心通道一端与8位阀上联通位置，使中心通道与工作通道准确连接，另一端与高精度注射泵相连而构成流动分析系统。一根光纤与光谱仪相连，另一根光纤与氙灯光源相连，两根光纤探头插入LOV流通池接口，光路垂直组成荧光测定模式。 　　2.2 试剂及溶液配制 　　荧光素汞（优级纯， 美国化学服务公司）;Na2S?9H2O（分析纯， 天津市福晨化学试剂厂）;其余试剂均为分析纯。实验用水为二次蒸馏水。 　　准确称取0.0159 g荧光素汞，用0.1 mol/L NaOH定容到100 mL棕色容量瓶中，浓度为1.874×10 Symbolm@@ 4 mol/L，冷藏备用，使用时稀释到所需浓度。准确称取0.240 g Na2S?9H2O，用水溶解并定容到100 mL，浓度为0.01 mol/L， 4 ℃密封保存备用，使用时用水稀释到所需浓度。 　　Kreb-Ringer′s（KR）营