培训课件--受体研究方法.pptVIP

（四）各种孵育结果所有抗体均不着色 1.H2O2终浓度不够或存放过久失效。 2.稀释液中有错误的正常血清（如猪抗兔酶标抗体稀释液中有正常兔血清）。 3.显色反应物溶于脱水的酒精、二甲苯或封片液中。 （五）某些抗体不着色 1.需要消化而没有消化。 2.封闭内源酶时使抗体活性下降。 3.切片在裱片或干燥时过热。 4.抗体过度稀释，一抗浓度小于二抗。 5.抗体过期或频繁冻融. （六）内源性酶活性： H2O2 -甲醇封闭不恰当。 （七）脱片 1.切片无粘附试剂。 2.切片不干净。 3.冰冻切片：组织在贴片前已经充分固定。 （八）核轮廓模糊 1.切片已干燥（特别是冰冻切片）。 2.苏木素染液欠佳。 （九）非特意性色淀 1.底物-显色液使用前未经过滤。 2.抗体使用前未离心。 （十）阳性反应太弱 1.抗体或其它试剂活性下降。 2.显色反应时间过短。 3.某些抗体的稀释度或孵育时间不够。 4.当加抗体时切片上缓冲液过多。 （十一）切片镜下模糊或黑点沉着 1.脱水不彻底：进入二甲苯前加一步等量石碳酸/二甲苯混合液。 2.温箱干燥替代脱水过程。 * * 原位杂交术（in situ hybridization） 即核酸分子杂交组织化学术，检测基因（DNA片段）的有无、基因的表达活性（mRNA） 原理：用带标记物的已知碱基顺序的核酸探针与细胞内待测核酸按碱基配对原则进行特异性原位结合（杂交），并通